【摘 要】
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目的构建p IRES2-MLAA34-EGFP重组质粒,并对其进行原核诱导表达。方法用RT-PCR的方法从U937细胞中提取MLAA-34基因,利用酶切、T4连接等分子生物学技术将MLAA-34目的基因克隆
【机 构】
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吉林市第一中学校,吉林医药学院检验学院
【基金项目】
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吉林省科技厅自然科学基金项目(20160101179JC);吉林省卫生和计划生育委员会项目(2015Z071);吉林省大学生创新创业课题(2015024)
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目的构建p IRES2-MLAA34-EGFP重组质粒,并对其进行原核诱导表达。方法用RT-PCR的方法从U937细胞中提取MLAA-34基因,利用酶切、T4连接等分子生物学技术将MLAA-34目的基因克隆至p IRES2-EGFP表达载体中,经PCR、酶切等技术对构建的重组表达载体p IRES2-MLAA34-EGFP进行鉴定后,转化大肠杆菌BL21并进行诱导表达。结果扩增出MLAA-34全长基因1 014 bp,构建了p IRES2-MLAA34-EGFP重组质粒,经PCR和双酶切鉴定,与预期大小一致。重组质粒在大肠杆菌中经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,所表达的融合蛋白与预期蛋白相符合。结论成功构建了p IRES2-MLAA34-EGFP重组质粒,并使其在大肠杆菌中高效表达。
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