【摘 要】
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为提高糖肽类抗生素A40926的发酵效价,本研究以野野村放线菌(Nonomuraea sp.)HIPI-H01为出发菌株,采用常压室温等离子体诱变系统进行诱变,并选择链霉素及A40926脂肪酸侧链生
【机 构】
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鲁南制药集团股份有限公司; 哺乳动物高效表达国家工程实验室;
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为提高糖肽类抗生素A40926的发酵效价,本研究以野野村放线菌(Nonomuraea sp.)HIPI-H01为出发菌株,采用常压室温等离子体诱变系统进行诱变,并选择链霉素及A40926脂肪酸侧链生物合成前体结构类似物乙酸钠为筛选压力,建立抗性筛选模型,以淘汰大部分不符合要求的突变菌株,使有效性状的突变株得以快速筛选出来,提高正突变率。在建立筛选抗性菌株方法的基础上,以抑菌圈筛选法进行初筛,初步筛得抑菌圈较大的168株突变株。结合出发菌株特性,选取24孔板进行复筛,并比较了微孔培养与摇瓶培养的相关性。结果表明,采用微孔板培养与摇瓶培养具有较好的一致性。与摇瓶培养相比,微孔板筛选体系具有效率高、可有效减少操作步骤及物料的使用量等优点。初筛菌株经微孔板复筛、抑菌圈法检测,筛选出24株发酵液抑菌圈较大的菌株,并以HPLC法检测发酵液中A40926效价,获得1株遗传性能稳定的突变株134#,其合成A40926的能力与原始菌株相比提高了17.6%,A40926效价达到809 mg/L。该菌株命名为野野村放线菌HIPI-M134。
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