【摘 要】
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目的:探索分选、鉴定和检测人外周血滤泡辅助T细胞(T follicular helper cells,Tfh)功能的方法。方法:使用密度梯度离心(density gradient centrifugation,DGC)、免疫磁珠分
【机 构】
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重庆医科大学附属第二医院感染科,重庆医科大学病毒性肝炎研究所
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目的:探索分选、鉴定和检测人外周血滤泡辅助T细胞(T follicular helper cells,Tfh)功能的方法。方法:使用密度梯度离心(density gradient centrifugation,DGC)、免疫磁珠分选(magnetic-activated cell sorting,MACS)和流式细胞仪(flow cytometry,FCM)分选法来分选人外周血Tfh细胞,分选后使用FCM检测细胞纯度和活性,实时荧光定量PCR检测细胞群的特异性转录因子B细胞淋巴瘤因子(B-cell lymphoma,Bcl)-6 mRNA的表达,激光共聚焦显微镜观察细胞形态和表面分子CD4、CXCR5的表达及定位,鉴定后使用FCM进行功能检测。结果:①FCM检测经分选后Tfh细胞纯度达(87.69±5.01)%,活性达(98.21±0.85)%,纯度和分选前有显著提高(P<0.05)。②实时定量PCR检测分选后的Tfh细胞群的Bcl-6 mRNA相对表达量显著高于分选前(P<0.05),分选后的Tfh细胞群具有高纯度。③激光共聚焦显微镜观察到分选后的Tfh细胞形态完整,CD4及CXCR5的荧光表达于细胞膜并可以融合。④FCM可检测分选鉴定后Tfh细胞功能相关的表面分子PD-1、ICOS、CD40L的表达。结论:采用DGC+MACS+FCM,经鉴定可以得到纯度高、活性好的Tfh细胞,并可以开展其功能检测。
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