【摘 要】
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目的 了解小鼠M1和M2型骨髓源性巨噬细胞（BMMφs）中非转移性黑色素瘤糖蛋白b（Gpnmb）表达的差异。方法原代培养小鼠BMMφs，免疫荧光染色F4／80和流式细胞仪检测CD11b鉴定巨噬细胞；用IFN-γ和LPS诱导BMMφs向M1型分化，用IL-4诱导向M2型分化。实时荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞标志物（TNF-α、iNOS）、M2型巨噬细胞标志物（MMR、Arg-1）和Gpn-mb的
【机 构】
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中南大学湘雅二医院肾内科,长沙410011,中南大学湘雅二医院肾内科,长沙410011
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目的 了解小鼠M1和M2型骨髓源性巨噬细胞（BMMφs）中非转移性黑色素瘤糖蛋白b（Gpnmb）表达的差异。方法原代培养小鼠BMMφs，免疫荧光染色F4／80和流式细胞仪检测CD11b鉴定巨噬细胞；用IFN-γ和LPS诱导BMMφs向M1型分化，用IL-4诱导向M2型分化。实时荧光定量PCR检测M1型巨噬细胞标志物（TNF-α、iNOS）、M2型巨噬细胞标志物（MMR、Arg-1）和Gpn-mb的mRNA表达；免疫荧光双染色、Western印迹、流式细胞仪检测Gpnmb与MMR的蛋白表达。结果（1）免疫荧光染色结果示BMMφs中F4／80高表达；流式细胞仪检测结果示BMMφs中有（92．7±6．1）％细胞表达CD11b，提示BMMφs培养成功；（2）相对于未分化的M0型BMMφs，TNF-α、iNOSmRNA在M1型BMMφs中高表达（P均〈0．01），而MMR、Arg-1mRNA在M2型BMMφs中高表达（P均〈0．01），提示原代M1、M2型BMMφs分化成功；（3）M2型BMMφs的GpnmbmRNA和蛋白表达均较M0型和M1型BMMφs显著增高（P均〈0．01）；免疫荧光双染色及流式细胞仪结果显示，BMMφs中Gpnmb与MMR共表达，在M2型BMMφs中MMR阳性BMMφs有（83．2±9．7）％表达Gpnmb。结论M2型BMMφs的Gpnmb表达较M1型BMMφs显著增高，提示Gpnmb可能作为鉴别M1、M2型巨噬细胞的标志物，在巨噬细胞的表型分化中起作用。
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