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【摘要】目的：测评结核分枝杆菌（MTB）γ-干扰素（γ-IFN）释放试验（IGRAs）用于结核感染疾病诊断中的价值。方法：选择2018年10月至2019年12月期间在我院就诊的88例MTB感染患者，其中痰涂阳性肺结核32例（甲组）、痰涂阴性肺结核38例（乙组）与单纯结核性胸膜炎18例（丙组），取同期健康体检志愿者45例（空白组），以受试者均进行IGRAs与TB-DNA检测，统计试验检测情况。结果：甲组、乙组、丙组及空白组IGRAs阳性率分别为87.50%、68.42%、50.00%、4.44%，差异存在统计学意义（P<0.05）；对比不同分型结核菌感染内痰涂片与TB-DNA检出阳性率，未见显著性差异（P>0.05）；IGRAs的敏感性、特异性分别为90.91%、77.27%，和PPD皮试76.14%、52.27%相比较，存在显著性差异（P<0.05）。结论：结核感染临床检查诊断中配合使用IGRAs，表现出较高的诊断价值，值得普及推广。
【关键词】结核感染；γ-干擾素；释放试验；诊断价值
[中图分类号]R52；R446.5 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2021）13-0153-02
MTB能以呼吸道、消化道与破损皮肤等为载体感染机体，可能还会导致多种脏器组织的结核病。结核病诊断始终是本病防治领域中的一大难题，结核培养与涂片抗酸染色为诊断结核的“金标准”，但暴露出培养周期长、灵敏度偏低、假阴性率偏高的不足[1]。肺外结核因完整标本获得困难或载菌量偏低等，构建病原学诊断的概率偏少，进一步增加结核感染诊断及鉴别诊断的难度，增加漏诊、误诊率，很可能使患者错过最佳治疗时机。IGRAs能激活CD4+、CD8+T细胞产生的MTB，进而定性判断其是否存在着MTB感染，为结核病临床诊治提供较可靠的支持[2]。为明确IGRAs诊断MTB感染的价值，本课题研究纳入了88例MTB感染患者与45例健康体检志愿者资料，均进行了IGRAs检测，针对具体情况作出如下报告分析。
1 资料与方法
1.1一般资料 选择2018年10月至2019年12月期间在我院就诊的88例MTB感染患者，45例健康体检者资料进行分析，参照结核类型把88例患者分为三组：甲组32例中男女比17： 15，年龄22～74岁，平均年龄（54.1±5.6）岁；乙组38例内男女比1： 1，年龄21～75岁，平均年龄（55.7±5.0）岁；丙组18例中男女比11： 7，年龄20～77岁，平均年龄（56.7±5.9）岁。空白组45例中男女比8： 7，年龄19～77岁，平均年龄（55.8±6.0）岁。以上受试者基线资料两两比较后，均无显著性差异（P>0.05）。MTB感染者均有确诊诊断[3]，均有进行IGRAs的指征，排除HIV感染、并发糖尿病、免疫抑制剂用药史、孕期妇女。肺部有典型结核病灶，且痰涂片找抗酸杆菌阳性即为痰涂阳性患者；肺部有典型结核病灶，但痰涂片找抗酸杆菌阴性即为痰涂阴性患者；肺部无典型结核病灶，仅一侧或双侧胸腔积液，抽取胸水完善检查明确胸水性质为结核性者为单纯结核性胸膜炎患者。
1.2方法 ①IGRAs：MTB感染者于次日晨起空腹状态下抽取4 mL肘静脉血，空白组于体检当日抽取4 mL静脉血，分别安放于两支抗凝管内，P、T、N管内分别添加植物血凝素、培养滤过蛋白10（CFP-10）、生理盐水，以上三管依次作为阳性对照、试验刺激管、空白对照管。把三管均安放于37℃恒温水浴箱内，连续培养24h，分离后予以12 min的离心处理，4800r/min，分离血清后提取上层血清，采用ELISA试验检测MTB。②痰结核分枝杆菌核酸（TB-DNA）： 采集受试者血清（EDTA抗凝管，室温条件下3000r/min离心10 min， 取上层清液），严格依照磁珠法核酸提取说明书提取DNA，针对提取的DNA样本量安放于-20℃冰箱内保存，备用。利用MTB DAN荧光定量PCR完成扩增，配合使用PE7500分析软件设定基线和阈值，建设标准曲线，每个标准店均要重复两次，观察曲线的斜率与相关系数，通过斜率计算出扩增效率。
1.3观察指标 痰涂阳性结核：结核痰涂片阳性结果，结核相关临床症状与影像学表现，而后对结核病作出诊断。痰涂阴性结核：符合如下≥3项时就预示着临床诊断成立：①出现经典的肺结核临床症状与肺CT表征；②能剔除他类非结核性肺疾病；③PPD或抗结核抗体显阳性；④确诊经抗结核方案医治有效。检测效能；分别记录两组检测方法对肺结核病诊断的敏感性、特异性、准确性。
1.4统计学处理 用SPSS16.0软件包处理数据，x±s表示计量资料；率（%）表示计数资料，c2检验。检验水准为c2=0.05。
2 结果
2.1IGRAs检测情况 四组受试者都完成了IGRAs检测，甲组、乙组、丙组及空白组IGRAs阳性检出分别有28例、26例、9例、2例，占比依次为87.50%（28/32）、68.42%（26/38）、50.00%（9/18）、4.44%（2/45），比较不同分组受试者IGRAs阳性率，差异存在着统计学意义（P<0.05）。比较两组肺结核患者血IGRAs与痰TB-DNA阳性检出率后，确认其无显著性差异，详见表1。
2.2两种不同方法的检测情况 IGRAs与PPD皮试方法的阳性检出率分别为90.91%（80/88）、89.77%（79/88）。两种方法对结核病的诊断准确率差异不显著，IGRAs检测的敏感度、特异性更高于PPD皮试法，有统计学意义（P>0.05）。详见表2。
3 讨论
结核病是由MTB感染引起的，呼吸道传播是人群传播的主要途径，解除排菌的肺结核患者是主要的传染源。MTB可以侵犯机体周身各个器官，以肺脏为主，脑膜、腹膜、骨骼等也有继发感染的可能。在环境污染、个体免疫机能降低等诸多因素作用下，近些年结核病致死人员有增加趋势，WHO预算[4]，2017年全球结核病潜伏感染17亿人，结核病发病率为133/10万，结核病致死157万人。除了少数是急性起病之外，临床上结核病发病通常是慢性进展性的，患者经常有低热、乏力等全身性症状与咳嗽、咯血等呼吸系统表现，一些结核病也可能没有症状。药物疗法是当下治疗结核病的重要手段之一，本病治疗周期相对较漫长，针对活动性结核患者，通常需要连续用药6～9月。 尽早对结核病作出正确诊断，进而采用规范化对症治疗，能尽早减轻或消除疾病症状体征，促进病情康复，改善患者生命健康质量。现如今，临床可供选择诊断结核感染的方法手段较多，其中细菌性培养为诊断本病的“金标准”，但其敏感性较低并且会耗用较长时间，在诊断肺外结核病方面不占优势，影像学、MTB抗体检查、分子诊断等方法在应用过程中均有一定局限性[5]。故而，临床继续探寻一种灵敏度高、特异性强的方法，尽早在结核感染发病早期作出准确诊断。
IGRAs是最近几年中开发出的一种新型免疫学方法，其能对MTB感染快速作出诊断。原理可以做出如下阐述：人体在感染MTB以后，体内就存在了特异的记忆T淋巴细胞，其于体外再次受到CFP-10等 MTB特异抗原刺激作用时，便会快速分泌于释放出γ-IFN，这样我们便可以通过检测γ-IFN水平，进而感知机体对MTB表现出的免疫应答状态，进而对机体是否出现MTB感染作出科学判断[6]。在本次研究中，甲组、乙组、丙组及空白组IGRAs阳性率分别为87.50%、68.42%、50.00%、4.44%，数据差异较为显著，存在统计学意义。而比较两组肺结核患者血IGRAs与痰TB-DNA阳性检出率后，确认其无显著性差异。另外，本次课题研究中IGRAs检测时采用了国产TB-IGRA是新鲜外周全血直接刺激培养，对实验室设备没有提出特别要求，CFP-10试剂为致病性特有但卡介疫苗没有的片段，其能较准确的辨识真性结核感染，解除BCG接种等方法形成的干扰。统计研究结果，IGRAs的敏感性、特异性分别为90.91%、77.27%，均高于PPD方法下的76.14%、52.27%，均形成较明显的差异，这间接的提示IGRAs是结核病诊断“金标准”之外的一个十分有效的辅助诊断方法[7]。并且TB-IGRA试剂在成本方面占据优势，能为我国基层医院诊断MTB感染提供一个有力、可靠工具。试剂有操作流程简单、迅速特征，24h便可出报告，为早发现、诊治结核病提供较科学依据[8]。
综合全文论述内容，IGRAs用于诊断MTB感染表现出较高的敏感度与特异性，能帮助临床医生尽早发现结核病，为诊疗方案制定工作提供较科学依据，可见其有较高的普及与推广价值。
参考文献
[1] 廖彦， 陈燕， 陈林， 等. γ-干扰素释放试验与结核分枝杆菌耐药基因特征研究[J]. 中国热带医学， 2020， 20（4）： 306-308+319.
[2] 朱俊， 马炜， 李亚周， 等. 基于γ干扰素释放试验的流式荧光免疫分析法检测结核分枝杆菌的方法学研究[J]. 第二军医大学学报， 2019， 40（7）： 721-726.
[3] 刘昂， 王爽. 结核分枝杆菌特异性蛋白抗原的研究进展[J]. 慢性病学杂志， 2019， 20（7）： 1001-1003， 1006.
[4] 蓝如束， 黄莉雯， 叶婧， 等. 探讨γ-干扰素释放试验在HIV/ AIDS患者中的结核病诊断价值[J]. 中国热带医学， 2019， 19（4）： 364-368.
[5] 王娜， 张理华， 陈冬爱. γ干扰素释放试验对结核病诊断的应用价值[J]. 山西职工医学院学报， 2019， 29（1）： 36-38.
[6] 滕新栋， 朱可， 郑健， 等. γ-干扰素释放试验诊断结核分枝杆菌感染的研究[J]. 中国国境卫生检疫杂志， 2017， 40（5）： 314-316.
[7] 邓雯秋， 趙贺红， 钟册俊， 等. 全血γ-干扰素释放试验对结核性脑膜炎的早期辅助诊断价值探讨[J]. 中国感染控制杂志， 2017， 16（9）： 837-840.
[8] 王海苓. 探究结核杆菌γ-干扰素体外释放试验对结核性胸腔积液的诊断价值[J]. 中国疗养医学， 2017， 26（4）： 426-427.
基金项目：衡阳市科技计划项目“肺部高分辨率CT、IFN-γ释放试验、痰TB-DNA在肺结核中的诊断价值比较”（编号：S2018F9031021259）
作者简介：杨歆（1984.08-）， 女， 研究生， 主治医师， 研究方向：常见传染病的临床诊治；
*通信作者：刘琼（1986.08-），女，硕士，主治医师，研究方向：病毒性肝炎、结核病的诊治。E_mail：drliuqiong@163.com
【关键词】结核感染；γ-干擾素；释放试验；诊断价值
[中图分类号]R52；R446.5 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2021）13-0153-02
MTB能以呼吸道、消化道与破损皮肤等为载体感染机体，可能还会导致多种脏器组织的结核病。结核病诊断始终是本病防治领域中的一大难题，结核培养与涂片抗酸染色为诊断结核的“金标准”，但暴露出培养周期长、灵敏度偏低、假阴性率偏高的不足[1]。肺外结核因完整标本获得困难或载菌量偏低等，构建病原学诊断的概率偏少，进一步增加结核感染诊断及鉴别诊断的难度，增加漏诊、误诊率，很可能使患者错过最佳治疗时机。IGRAs能激活CD4+、CD8+T细胞产生的MTB，进而定性判断其是否存在着MTB感染，为结核病临床诊治提供较可靠的支持[2]。为明确IGRAs诊断MTB感染的价值，本课题研究纳入了88例MTB感染患者与45例健康体检志愿者资料，均进行了IGRAs检测，针对具体情况作出如下报告分析。
1 资料与方法
1.1一般资料 选择2018年10月至2019年12月期间在我院就诊的88例MTB感染患者，45例健康体检者资料进行分析，参照结核类型把88例患者分为三组：甲组32例中男女比17： 15，年龄22～74岁，平均年龄（54.1±5.6）岁；乙组38例内男女比1： 1，年龄21～75岁，平均年龄（55.7±5.0）岁；丙组18例中男女比11： 7，年龄20～77岁，平均年龄（56.7±5.9）岁。空白组45例中男女比8： 7，年龄19～77岁，平均年龄（55.8±6.0）岁。以上受试者基线资料两两比较后，均无显著性差异（P>0.05）。MTB感染者均有确诊诊断[3]，均有进行IGRAs的指征，排除HIV感染、并发糖尿病、免疫抑制剂用药史、孕期妇女。肺部有典型结核病灶，且痰涂片找抗酸杆菌阳性即为痰涂阳性患者；肺部有典型结核病灶，但痰涂片找抗酸杆菌阴性即为痰涂阴性患者；肺部无典型结核病灶，仅一侧或双侧胸腔积液，抽取胸水完善检查明确胸水性质为结核性者为单纯结核性胸膜炎患者。
1.2方法 ①IGRAs：MTB感染者于次日晨起空腹状态下抽取4 mL肘静脉血，空白组于体检当日抽取4 mL静脉血，分别安放于两支抗凝管内，P、T、N管内分别添加植物血凝素、培养滤过蛋白10（CFP-10）、生理盐水，以上三管依次作为阳性对照、试验刺激管、空白对照管。把三管均安放于37℃恒温水浴箱内，连续培养24h，分离后予以12 min的离心处理，4800r/min，分离血清后提取上层血清，采用ELISA试验检测MTB。②痰结核分枝杆菌核酸（TB-DNA）： 采集受试者血清（EDTA抗凝管，室温条件下3000r/min离心10 min， 取上层清液），严格依照磁珠法核酸提取说明书提取DNA，针对提取的DNA样本量安放于-20℃冰箱内保存，备用。利用MTB DAN荧光定量PCR完成扩增，配合使用PE7500分析软件设定基线和阈值，建设标准曲线，每个标准店均要重复两次，观察曲线的斜率与相关系数，通过斜率计算出扩增效率。
1.3观察指标 痰涂阳性结核：结核痰涂片阳性结果，结核相关临床症状与影像学表现，而后对结核病作出诊断。痰涂阴性结核：符合如下≥3项时就预示着临床诊断成立：①出现经典的肺结核临床症状与肺CT表征；②能剔除他类非结核性肺疾病；③PPD或抗结核抗体显阳性；④确诊经抗结核方案医治有效。检测效能；分别记录两组检测方法对肺结核病诊断的敏感性、特异性、准确性。
1.4统计学处理 用SPSS16.0软件包处理数据，x±s表示计量资料；率（%）表示计数资料，c2检验。检验水准为c2=0.05。
2 结果
2.1IGRAs检测情况 四组受试者都完成了IGRAs检测，甲组、乙组、丙组及空白组IGRAs阳性检出分别有28例、26例、9例、2例，占比依次为87.50%（28/32）、68.42%（26/38）、50.00%（9/18）、4.44%（2/45），比较不同分组受试者IGRAs阳性率，差异存在着统计学意义（P<0.05）。比较两组肺结核患者血IGRAs与痰TB-DNA阳性检出率后，确认其无显著性差异，详见表1。
2.2两种不同方法的检测情况 IGRAs与PPD皮试方法的阳性检出率分别为90.91%（80/88）、89.77%（79/88）。两种方法对结核病的诊断准确率差异不显著，IGRAs检测的敏感度、特异性更高于PPD皮试法，有统计学意义（P>0.05）。详见表2。
3 讨论
结核病是由MTB感染引起的，呼吸道传播是人群传播的主要途径，解除排菌的肺结核患者是主要的传染源。MTB可以侵犯机体周身各个器官，以肺脏为主，脑膜、腹膜、骨骼等也有继发感染的可能。在环境污染、个体免疫机能降低等诸多因素作用下，近些年结核病致死人员有增加趋势，WHO预算[4]，2017年全球结核病潜伏感染17亿人，结核病发病率为133/10万，结核病致死157万人。除了少数是急性起病之外，临床上结核病发病通常是慢性进展性的，患者经常有低热、乏力等全身性症状与咳嗽、咯血等呼吸系统表现，一些结核病也可能没有症状。药物疗法是当下治疗结核病的重要手段之一，本病治疗周期相对较漫长，针对活动性结核患者，通常需要连续用药6～9月。 尽早对结核病作出正确诊断，进而采用规范化对症治疗，能尽早减轻或消除疾病症状体征，促进病情康复，改善患者生命健康质量。现如今，临床可供选择诊断结核感染的方法手段较多，其中细菌性培养为诊断本病的“金标准”，但其敏感性较低并且会耗用较长时间，在诊断肺外结核病方面不占优势，影像学、MTB抗体检查、分子诊断等方法在应用过程中均有一定局限性[5]。故而，临床继续探寻一种灵敏度高、特异性强的方法，尽早在结核感染发病早期作出准确诊断。
IGRAs是最近几年中开发出的一种新型免疫学方法，其能对MTB感染快速作出诊断。原理可以做出如下阐述：人体在感染MTB以后，体内就存在了特异的记忆T淋巴细胞，其于体外再次受到CFP-10等 MTB特异抗原刺激作用时，便会快速分泌于释放出γ-IFN，这样我们便可以通过检测γ-IFN水平，进而感知机体对MTB表现出的免疫应答状态，进而对机体是否出现MTB感染作出科学判断[6]。在本次研究中，甲组、乙组、丙组及空白组IGRAs阳性率分别为87.50%、68.42%、50.00%、4.44%，数据差异较为显著，存在统计学意义。而比较两组肺结核患者血IGRAs与痰TB-DNA阳性检出率后，确认其无显著性差异。另外，本次课题研究中IGRAs检测时采用了国产TB-IGRA是新鲜外周全血直接刺激培养，对实验室设备没有提出特别要求，CFP-10试剂为致病性特有但卡介疫苗没有的片段，其能较准确的辨识真性结核感染，解除BCG接种等方法形成的干扰。统计研究结果，IGRAs的敏感性、特异性分别为90.91%、77.27%，均高于PPD方法下的76.14%、52.27%，均形成较明显的差异，这间接的提示IGRAs是结核病诊断“金标准”之外的一个十分有效的辅助诊断方法[7]。并且TB-IGRA试剂在成本方面占据优势，能为我国基层医院诊断MTB感染提供一个有力、可靠工具。试剂有操作流程简单、迅速特征，24h便可出报告，为早发现、诊治结核病提供较科学依据[8]。
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参考文献
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[8] 王海苓. 探究结核杆菌γ-干扰素体外释放试验对结核性胸腔积液的诊断价值[J]. 中国疗养医学， 2017， 26（4）： 426-427.
基金项目：衡阳市科技计划项目“肺部高分辨率CT、IFN-γ释放试验、痰TB-DNA在肺结核中的诊断价值比较”（编号：S2018F9031021259）
作者简介：杨歆（1984.08-）， 女， 研究生， 主治医师， 研究方向：常见传染病的临床诊治；
*通信作者：刘琼（1986.08-），女，硕士，主治医师，研究方向：病毒性肝炎、结核病的诊治。E_mail：drliuqiong@163.com