【摘 要】
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目的 探讨细菌脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞(AEC)炎症反应及可能的反应机制.方法 将人肺腺癌细胞系A549细胞株分为2组:对照组和LPS干预组,分别培养并于0.5 h、2 h、6 h和12
【机 构】
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秦皇岛市第一医院呼吸科,解放军总医院呼吸科
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目的 探讨细菌脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞(AEC)炎症反应及可能的反应机制.方法 将人肺腺癌细胞系A549细胞株分为2组:对照组和LPS干预组,分别培养并于0.5 h、2 h、6 h和12 h时留取标本进行相关细胞因子检测.酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1),放射免疫法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)的水平.实时荧光定量PCR检测TLR-4 mRNA的表达;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白IκBα和NF-κB p65蛋白水平,观察NF-κB的活性变化.结果 与对照组比较,LPS使AECs分泌的ICAM-1,TNF-α和IL-8于2 h、6 h和12 h均升高,ICAM-1,TNF-α于2 h、IL-8于12 h达分泌高峰;作用2 h后TLR-4 mRNA表达明显升高并达到峰值(27.88±13.31),6 h后(19.82±15.58)仍高于对照组(1.00±0.00),组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),12 h时(12.86±11.45)组间比较差异无统计学意义(P＞0.05);NF-κB活性于刺激后0.5 h、2 h、6 h和12 h均明显增加,表现为抑制蛋白IκBα迅速降解,NF-κB p65蛋白同步释出并转入细胞核内.结论 LPS能够激活肺泡上皮细胞使其释放大量炎性因子,这一过程可能是通过激活TLR-4并进而激活NF-κB而诱导了AECs的炎性损伤.
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