【摘 要】
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旨在制备高纯度的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NS3蛋白,为建立牛病毒性腹泻ELISA检测试剂盒奠定基础,用于区分疫苗免疫和野毒感染。根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒非结构
【基金项目】
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广西自然科学基金面上项目(2012GXNSFAA053074);广西特聘专家专项(2011B020)
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旨在制备高纯度的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)NS3蛋白,为建立牛病毒性腹泻ELISA检测试剂盒奠定基础,用于区分疫苗免疫和野毒感染。根据GenBank中已发表的牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白NS3基因设计一对特异性引物,用PCR扩增1 206bp目的片段,克隆到pET-32a表达载体,成功构建重组质粒pET-32a-NS3。将重组质粒转化大肠埃希菌Transetta(DE3)用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE分析,结果表明重组NS3蛋白在体外得到较好表达,表达的融合蛋白分子质量为61ku。可溶性分析表明重组NS3蛋白以包涵体的形式存在,经镍柱His标签蛋白纯化后进行Western blot鉴定,结果表明表达的NS3重组蛋白能与BVDV的阳性血清反应。说明所制备的NS3蛋白反应性好,可用作ELISA的包被抗原。
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