土壤微生物代谢对土壤养分循环和生态系统的稳定至关重要。为明确施加生物炭对土壤微生物代谢养分限制和碳利用效率（carbon use efficiency, CUE）的长效影响机制，于2012年将果树树干、枝条生物炭（450℃、限氧条件下裂解）以不同用量(0、20、40、60和80 t·hm^-2)施入塿土，与耕层土壤（0～20 cm）混匀，小麦玉米轮作7a后，通过生态酶化学计量学对土壤微生物代谢养分限制特征进行了定量分析和比较。结果表明：①随生物炭施用量的增加，土壤含水量、有机碳、全氮、碳氮比、碳磷比和氮磷比显著提高，碳氮磷活性组分、微生物生物量碳氮磷和总磷未表现出明显的规律性，而5种胞外酶活性（β-1,4-葡萄糖苷酶、纤维素酶、亮氨酸氨基多肽酶、β-1,4-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶和磷酸酶）显著降低。②所有处理土壤微生物均受磷限制；在施加生物炭各处理中，随施用量的增加微生物代谢碳和磷限制显著提高，微生物CUE显著降低；当生物炭施用量为20 t·hm^-2时，碳限制（0.625±0.022）和磷限制（62.153°±0.892°）最低，微生物CUE（0.511±0.007）最高。③偏最小二乘路径建模分析表明，土壤碳氮磷及其元素化学计量比对磷限制产生了直接的极显著正效应（P<0.01），碳限制与磷限制呈正相关关系(R²=0.242，P<0.001)，而碳磷限制又对CUE产生了极显著的负效应（P<0.001）。综上，过量施用生物炭使土壤元素化学计量失衡是导致土壤微生物代谢磷限制加剧的重要因素，继而诱导了微生物碳限制的增强和CUE的降低。当生物炭施加量为20 t·hm^-2时，微生物代谢所受碳磷限制最低，且具有最高的微生物CUE，对于调节土壤微生物代谢、维持生态功能和减少微生物二氧化碳排放最优。