鸭乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

来源 :中国动物传染病学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:oursoftware
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本研究根据鸭乙型肝炎病毒(DHBV)基因组C基因序列设计一对特异性引物,建立一种快速检测DHBV的SYBR Green荧光定量PCR方法.该方法在7.8×102 copies/μL~7.8×108 copies/μL模板量时,呈现良好的线性关系,相关系数R2为0.999.利用该方法对来自山东不同地区的95份临床样品进行检测.结果显示,该方法特异性好,临床样品检测阳性率与常规PCR方法的符合率为97.9%,且灵敏度高于普通PCR约100倍.将该方法应用于DHBV感染雏鸭的动力学研究,结果表明,DHBV感染雏鸭11 d时病毒含量达到高峰,随后逐渐下降.该方法的建立不仅为临床提供一种对DHBV的快速准确的检测方法,也为药物有效评价时间点的选择提供了理论依据.
其他文献
以灵芝菌株G8作为研究对象,以菌丝干重为指标,通过单因素试验,研究不同静置时间、装液量、初始pH对灵芝液体培养菌丝干重的影响.结果表明,当初始pH为5.0,250 mL摇瓶装液量为90 mL,静置时间为24 h时,灵芝的生长情况最好.进一步研究Fe2+、Cu2+、K+、Mg2+、Ca2+对灵芝菌株G8液体培养过程中产漆酶的影响,通过单因素试验对比得出矿质元素种类和浓度对漆酶活性的影响.以添加KCl、CuSO4、CaCO3、MgSO4进行L9(34)正交试验,结果表明矿质元素添加物包含KCl 0.1 g·L
广西是我国食用菌生产大省,有非常丰富的食用菌资源,并且由于天然的地理优势和政策的支持,广西省有发展食用菌小镇生态旅游的巨大潜力.广西省可以通过构建小镇食用菌产业园、挖掘小镇特色、为民做好实事、提高全民生态环保意识、发挥产业联动等方式,来构建食用菌小镇生态旅游,建设宜居宜业食用菌小镇,促进乡镇生态旅游的可持续发展.
细胞培养流感病毒生产疫苗过程中细胞系的选择至关重要,本研究建立了可控表达H9N2亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的MDCK细胞系,能有效支持H9N2流感病毒的扩增.本研究应用插入四环素调控元件和H9N2亚型禽流感病毒HA基因的重组质粒V2-H9,与辅助质粒pMDSV、psPAX2共转染293T细胞包装慢病毒,将包装出的慢病毒感染MDCK细胞,通过添加嘌呤霉素筛选出阳性的单克隆细胞.再用PR8 SH441病毒感染筛选出来的MDCK单克隆细胞.结果显示,流感病毒在其中4株MDCK单克隆细胞的HA效价接近于8;
比较稻草与麦秸栽培基质对大球盖菇产量、功能性成分的含量和抗氧化活性的影响,并分析其相关性.结果表明,麦秸基质栽培大球盖菇的产量较高,为3.22 kg·m-2(P<0.01);稻草基质栽培大球盖菇功能性成分的含量均高于麦秸基质(P<0.01),其氨基酸、蛋白质、多糖、总黄酮、总三萜、多酚含量分别为1.78%、1.64%、7.07%、1.25%、0.87%、0.54%;在5 mg·mL-1水提液中,稻草与麦秸基质栽培的大球盖菇水提液清除DPPH活性分别为72.68%、67.60%.大球盖菇水提液抗氧化活性与氨
以香菇品种9608和久香4号的双核菌丝,分别与申香215的单核菌丝进行双单杂交,再对杂交菌丝进行高温处理,获得目的杂交菌株继续进行出菇试验.筛选所得杂交菌株9X2-19和菌株久X2-4,可做进一步的中间试验.
暗褐网柄牛肝菌(Phlebopus portentosus)是目前唯一能够工厂化栽培的食用牛肝菌,其对栽培基质的养分需求较高,但利用率较低,导致采收后的菌包中余留了大量的营养物质.在明确暗褐网柄牛肝菌栽培基质出菇前后营养成分变化的基础上,直接采用灭菌后废菌包栽培平菇、榆黄蘑、茶树菇3种腐生食用菌.结果显示,暗褐网柄牛肝菌菌渣栽培基质中灰分含量高于出菇前及原材料;出菇前后栽培基质的纤维素、木质素等营养成分无明显变化,表明暗褐网柄牛肝菌对富含纤维素、木质素的木屑等栽培基质利用率低.平菇、榆黄蘑和茶树菇在暗褐网
目的 研究通过加速试验在较短时间内对高可靠性、小子样电子产品的可靠性进行评估的方法.方法 分析可靠性加速试验方案的特点,梳理可靠性加速试验方案制定的基本流程,通过结合数理统计和故障物理技术,研究加速应力的确定方法和加速因子的计算模型,给出加速试验条件及试验时间的确定流程以及相应的试验结果评估方法,并进行案例应用.结果 该方法克服了常规可靠性加速试验方案设计中仅依靠经验并需要大样本量的缺点,科学有效地解决了高可靠性、小样本产品的可靠性加速试验方案设计问题,形成了电子设备基于故障物理和数理统计相结合的可靠性加
为明确从山东某鸭场分离的血清3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-3)的致病性和遗传特征,首先对分离鉴定的毒株进行VP1基因序列测定,与GenBank中发布的基因序列比对,并进行动物试验.分离的病毒株命名为DHAV-3-SDWF,2008~2020年分离的DHAV-3毒株主要Ⅰ和Ⅱ基因型,基因Ⅰ型又形成Ⅰa和Ⅰb两个分支,该病毒属于Ⅰa分支.DHAV-3-SDWF对雏鸭致病性强,攻毒鸭的肝脏、脾脏、肾脏等器官剖检变化和组织病变明显,这与该病毒在各组织器官中的转录水平是一致的.总之,DHAV-3的分离鉴定及致病性分
以云南地区2个野生香蘑属真菌子实体(H和Z2)为试验材料,结合GenBank中数据,开展ITS序列研究,探讨该序列作为香蘑属真菌系统发育研究的可行性及传统分类与分子系统发育分析的异同.用PCR方法扩增了2个供试样品的rDNA ITS(含5.8S)序列并测序,与GenBank中已提交的香蘑属菌株的ITS序列进行比较,分析了云南不同地区2个供试样品ITS序列的一级结构与其RNA二级结构的变异规律.去除两端未对齐的区域后,2个样品与GeneBank中8条同源序列的ITS比对长度为632 bp,(G+C)含量41
建立一种能够快速检测动物源性食品中多种氟喹诺酮类药物残留的直接竞争化学发光酶免疫法.用诺氟沙星(NOR)分子修饰后制备的完全抗原免疫小鼠,获得对10种氟喹诺酮类药物具有广谱特异性的单克隆抗体,采用二因子交叉试验确定包被原与酶标抗体的最佳稀释度,通过单因素试验优化最佳包被条件、封闭液种类、竞争反应时间,从而建立反应过程的最佳条件,并对方法的灵敏度、交叉反应率、精密度进行评价.结果表明:NOR-1-OVA包被浓度0.3μg/mL,酶标抗体的稀释倍数为1:8000时为最佳稀释浓度;4℃包被过夜,封闭液为1%BS