人羊膜间充质干细胞外泌体通过miR-135a促进成纤维细胞迁移实验研究

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目的 研究人羊膜间充质干细胞外泌体(human amnion mesenchymal stem cell exosome,hAMSCExo)中的微小RNA-135a(micro RNA-135a,miR-135a)对成纤维细胞迁移的作用。方法 用外泌体分离试剂盒提取hAMSC-Exo并进行鉴定,划痕实验检测hAMSC-Exo对成纤维细胞迁移的作用。实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)检测过表达miR-135a后hAMSC-Exo中miR-135a基因相对表达量,划痕实验检测过表达和敲减miR-135a后hAMSC-Exo对成纤维细胞迁移的作用,Western blot检测过表达和敲减miR-135a后成纤维细胞迁移相关蛋白[大分子肿瘤抑制因子2(large tumor suppressor 2,LATS2)、E-钙黏着蛋白(Ecadherin)、N-cadherin、α平滑肌肌动蛋白(αsmooth muscle actin,α-SMA)]的相对表达量,均以293T细胞外泌体及单纯hAMSC-Exo作为对照。结果 成功获得hAMSC-Exo;划痕实验检测示,hAMSC组促进成纤维细胞迁移能力最强,GW4869(外泌体抑制剂)处理hAMSC组促进成纤维细胞迁移能力减弱。qRT-PCR检测示过表达miR-135a后,hAMSC-Exo中miR-135a基因相对表达量明显增加。划痕实验检测示,过表达miR-135a后,hAMSC-Exo促进成纤维细胞迁移能力增强;而敲减miR-135a后,hAMSC-Exo促进成纤维细胞迁移能力减弱。Western blot检测成纤维细胞迁移相关蛋白显示,与293T细胞外泌体组比较,各hAMSC-Exo处理组下调E-cadherin、Ncadherin和LATS2的蛋白表达,上调α-SMA的表达;过表达miR-135a后,hAMSC-Exo下调E-cadherin、Ncadherin、LATS2表达和上调α-SMA表达的能力增强;敲减miR-135a后,hAMSC-Exo下调E-cadherin、Ncadherin、LATS2表达和上调α-SMA表达的能力较过表达miR-135a组下降。结论 hAMSC-Exo中的miR-135a可促进成纤维细胞迁移,抑制E-cadherin、N-cadherin和LATS2的表达,促进α-SMA的表达。
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