体外观察血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体贝伐单抗对人肺癌A549细胞增殖和侵袭力的影响，并初步探讨其可能的机制。
方法以贝伐单抗处理A549细胞，采用细胞计数试剂盒8(CCK－8)和Transwell法检测A549细胞增殖活性及侵袭能力，实时荧光定量PCR和Western blot检测A549细胞中基质金属蛋白酶2(MMP－2)、基质金属蛋白酶9(MMP－9)和肝细胞生长因子受体(c－Met) mRNA和蛋白的表达水平。
结果CCK－8检测结果显示，贝伐单抗对A549细胞增殖活性的影响有双向作用。10 μg/ml贝伐单抗处理A549细胞48 h和72 h的吸光度(A)值分别为0.79±0.10和0.90±0.18，对A549细胞增殖有抑制作用。100 μg/ml贝伐单抗处理A549细胞48 h和72 h的A值分别为1.77±0.13和2.07±0.14，对A549细胞增殖有促进作用。侵袭实验显示，50 μg/ml贝伐单抗组对A549细胞侵袭力的抑制作用最强，其穿过膜细胞数为(16 406.19±5 674.23)个，明显低于对照组的(36 108.68±6 263.83)个，差异有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测显示，贝伐单抗处理A549细胞48 h对MMP－2、MMP－9和c－Met mRNA的表达均有双向调节作用。50 μg/ml贝伐单抗对A549细胞中MMP－2和MMP－9 mRNA表达的抑制作用最强，其表达水平分别为0.13±0.08和0.13±0.06。10 μg/ml贝伐单抗对A549细胞中c－Met mRNA表达的抑制作用最强，其表达水平为0.18±0.04，明显低于对照组(P<0.01)。100 μg/ml贝伐单抗对A549细胞中MMP－2、MMP－9和c－Met mRNA表达有促进作用，其表达水平分别为1.82±0.31、1.60±0.25和2.63±0.48 ，明显高于对照组(P<0.05)。10 μg/ml贝伐单抗对A549细胞中MMP－2和MMP－9 mRNA的抑制作用呈时间依赖性。Western blot检测显示，贝伐单抗对A549细胞中MMP－2和c－Met蛋白表达有双向调节作用。100 μg/ml贝伐单抗对A549细胞中MMP－2和c－Met蛋白表达有促进作用，其表达水平分别为1.07±0.09和0.98±0.06，明显高于对照组(P<0.05)。50 μg/ml贝伐单抗对MMP－2蛋白表达的抑制作用最强，其表达量为0.11±0.04，明显低于对照组(P<0.01)。10 μg/ml贝伐单抗对c－Met蛋白表达的抑制作用最强，其表达水平为0.38±0.01，明显低于对照组(P<0.01)。不同浓度贝伐单抗对A549细胞中MMP－9蛋白的表达影响均无统计学意义(P>0.05)。10 μg/ml贝伐单抗对A549细胞中MMP－2、MMP－9和c－Met蛋白表达的抑制作用随时间变化逐渐增强。
结论一定浓度的贝伐单抗对A549细胞的增殖及侵袭力有明显的抑制作用，但较高浓度(100 μg/ml)的贝伐单抗对A549细胞侵袭的抑制作用减弱，甚至对细胞增殖表现出促进作用，这可能与贝伐单抗对MMP－2和c－Met蛋白的非浓度依赖性抑制有关。