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摘要：目的：研究蓝藻提取物对胃癌细胞株SGC7901生长的影响。方法：体外于适当条件下对SGC7901细胞进行传代培养，后将其接种于96孔板内培养24h，每孔100ul，同时用RPMI1640培养液作为溶剂将固态蓝藻提取物配制成不同浓度的提取物溶液，并将其加到96孔板中与细胞株作用72h，每孔加入提取物溶液100ul，后使用MTT法检测不同浓度组的溶液与对照组相比吸光度值的差异是否具有统计学意义，判断其对细胞生长的影响。结果：当淡水蓝藻提取物溶液浓度为20ug/ml，40ug/ml，80ug/ml，160ug/ml时，P<0.05，差异具有统计学意义，提取物对细胞生长有抑制作用；浓度为10ug/ml，320ug/ml时P>0.05，差异无统计学意义，提取物对细胞抑制作用不明显。结论：淡水蓝藻提取物对胃癌细胞生长具有抑制作用，呈浓度依赖性。
关键词：蓝藻提取物 胃癌细胞SGC7901 MTT
肿瘤是危害人类健康的主要疾病，居人类死亡原因的第二位[1]，其中，胃癌又是我国最常见的肿瘤之一，病死率高[2]。淡水蓝藻提取物便是近年研究发现有着广泛生物学活性的植物提取物。蓝藻，又名蓝细菌、蓝绿藻， 是一类进化历史悠久、革兰氏阴性、无鞭毛、含叶绿素a、不形成叶绿体、能进行产氧性光合作用的原核生物[3]。自20世纪70年代以来，人们已从多种藻类中分离到具有抗肿瘤活性的新化合物，尤其是近年来，由于快速分子筛选方法的应用，大大加快了抗肿瘤药物的筛选步伐。目前，已作为抗癌药物进入临床前及临床试验的海洋生物活性物质多达几十个，其中有些即来自藻类，显示了从藻类中筛选抗肿瘤天然化合物的巨大潜力[4]。因此，本实验以淡水蓝藻提取物为研究对象，观察其对胃癌细胞株SGC7901生长的影响，以期为其进一步研究开发和临床应用提供可靠的实验依据。
1. 材料
1.1 细胞株和主要试剂 人胃癌细胞株SGC7901（四川大学华西临床医学院科技园提供） ；RPMI1640培养基、胰蛋白酶、新生牛血清、PBS溶液；二甲基亚砜（ DMSO）、四甲基偶氮唑蓝（ MTT） （ 均为哈利生物公司产品） ；淡水蓝藻提取物（ 陕西森佛实业高科有限公司提供） 。
1.2 试验仪器 生物洁净工作台；酶标定量测定仪；倒置式生物显微镜。
2.试验方法
2.1 细胞株的培养
细胞在含10%新生牛血清，90%的RPMI1640的培养液中贴壁生长，在37℃、5.6%CO2培养箱中传代培养。
2.2 分组
空白对照组（培养基），蓝藻提取物剂量组（浓度分别为10ug/ml，20ug/ml，40ug/ml，80ug/ml，160ug/ml，320ug/ml，培养基作溶剂） 。
2.3 MTT 法测定细胞存活率
选择对数生长期胃癌细胞，调整细胞数为1×104个细胞/孔接种于96孔培养板，各孔终体积均为100ul，在37℃、5.6% CO2、饱和湿度条件下的培养箱中培养24h，后各孔加入100ul蓝藻提取物溶液，每组4个复孔。作用72h后每孔加入5mg/ml的MTT20ul，37℃，5.6%CO2孵育4h，弃去孔中的MTT，每孔加入200ul的DMSO溶液，在酶标仪中震荡10min，在波长470nm处测每孔吸光度（A），根据A值判定药物对细胞增殖的影响。生长抑制率IR（%）=（1-B/A ）×100%（A、B分别为对照组和实验组的光密度值） 。
3.结果
4.讨论
在国内的有关研究中，首先是出现了大量关于水华问题的报道。由于水中氮、磷含量的急剧增加，导致水华在世界各地频频发生，成为了一个世界性的环境卫生问题[5]。该实验从某种程度上提出了一条整治蓝藻，解决这一环境卫生问题的新途径，即并非单纯的阻止工厂排放污水，而是换一个角度，从已经生长出来的蓝藻中挖掘其潜在的医学价值，使得人类不再过分的苦于怎样阻止蓝藻的生长，使水华问题得到有效解决。
从本实验结果来看，蓝藻提取物的确具有一定的医学价值，其浓度从10ug/ml开始以2倍的增幅依次往上递增，胃癌细胞的生长受抑制的程度逐渐增加，当提取物的浓度为160ug/ml时，生长抑制率达到所有实验组中的最大值，25.84%，后其浓度继续增大时，抑制的作用呈现出下降的趋势，即当浓度为320ug/ml时，细胞生长抑制率降低为8.24%。可见蓝藻提取物在一定浓度范围内对胃癌细胞的生长具有抑制作用，但是由于细胞生长抑制率未达到较高的值，因此在后续试验中可考虑在160ug/ml和320ug/ml两个浓度之间再增设几个浓度梯度以找到对胃癌细胞株生长抑制最有效的浓度作用值。
同时在此实验的基础上，对于蓝藻抑制胃癌细胞生长的机制也可作进一步的研究。从胃癌的形成的角度来看，比如幽门螺杆菌等可通过致胃黏膜上皮细胞增值加速、凋亡增加、基因表达异常等机制而出现胃肿瘤细胞[6]。从治疗的角度来看，有研究者对肿瘤细胞的凋亡过程作了进一步的研究，该过程是一个受半胱天冬酶和促凋亡蛋白共同作用的细胞死亡过程，而结论则是吡咯昔康和C-藻蓝蛋白合用比单一药物诱导细胞凋亡效果更加明显，因此可以从细胞凋亡的角度来研究蓝藻治疗胃癌的机制。同时对于蓝藻中的C-藻蓝蛋白，其还被报道具有抗炎抗癌的作用，起作用的有可能是重组体C-PC/β，它促进肿瘤细胞的凋亡和抑制它的生长。
参考文献：
[1]. 吕广鑫等.熊果酸对胃癌细胞株SGC7901的抑制作用 [J].牡丹江医学院学报，2011，32（4）：3-6
[2]. 寇冲.青年人胃癌100例分析 [J].内蒙古中医药，2010， 11：49-50
[3]. 杨苏等.滇池蓝藻资源综合利用的研究进展 [J].云南化工，2006， 33（3）：49-54
[4]. 李锦全等.藻类抗肿瘤物质活性研究进展 [J].海洋通报，2003， 22（1）：77-85
[5]. Huang Lei， Sun Kai， Ban Jie， Bi Jun. Public perception of blue-algae bloom risk in Hongze Lake of China [J]. Environmental management， 2010， 45（5）：1065-1075
[6].崔轶霞等.幽门螺杆菌致胃癌发生的机制研究进展 [J].现代肿瘤医学，2006，14（5）：625-627
关键词：蓝藻提取物 胃癌细胞SGC7901 MTT
肿瘤是危害人类健康的主要疾病，居人类死亡原因的第二位[1]，其中，胃癌又是我国最常见的肿瘤之一，病死率高[2]。淡水蓝藻提取物便是近年研究发现有着广泛生物学活性的植物提取物。蓝藻，又名蓝细菌、蓝绿藻， 是一类进化历史悠久、革兰氏阴性、无鞭毛、含叶绿素a、不形成叶绿体、能进行产氧性光合作用的原核生物[3]。自20世纪70年代以来，人们已从多种藻类中分离到具有抗肿瘤活性的新化合物，尤其是近年来，由于快速分子筛选方法的应用，大大加快了抗肿瘤药物的筛选步伐。目前，已作为抗癌药物进入临床前及临床试验的海洋生物活性物质多达几十个，其中有些即来自藻类，显示了从藻类中筛选抗肿瘤天然化合物的巨大潜力[4]。因此，本实验以淡水蓝藻提取物为研究对象，观察其对胃癌细胞株SGC7901生长的影响，以期为其进一步研究开发和临床应用提供可靠的实验依据。
1. 材料
1.1 细胞株和主要试剂 人胃癌细胞株SGC7901（四川大学华西临床医学院科技园提供） ；RPMI1640培养基、胰蛋白酶、新生牛血清、PBS溶液；二甲基亚砜（ DMSO）、四甲基偶氮唑蓝（ MTT） （ 均为哈利生物公司产品） ；淡水蓝藻提取物（ 陕西森佛实业高科有限公司提供） 。
1.2 试验仪器 生物洁净工作台；酶标定量测定仪；倒置式生物显微镜。
2.试验方法
2.1 细胞株的培养
细胞在含10%新生牛血清，90%的RPMI1640的培养液中贴壁生长，在37℃、5.6%CO2培养箱中传代培养。
2.2 分组
空白对照组（培养基），蓝藻提取物剂量组（浓度分别为10ug/ml，20ug/ml，40ug/ml，80ug/ml，160ug/ml，320ug/ml，培养基作溶剂） 。
2.3 MTT 法测定细胞存活率
选择对数生长期胃癌细胞，调整细胞数为1×104个细胞/孔接种于96孔培养板，各孔终体积均为100ul，在37℃、5.6% CO2、饱和湿度条件下的培养箱中培养24h，后各孔加入100ul蓝藻提取物溶液，每组4个复孔。作用72h后每孔加入5mg/ml的MTT20ul，37℃，5.6%CO2孵育4h，弃去孔中的MTT，每孔加入200ul的DMSO溶液，在酶标仪中震荡10min，在波长470nm处测每孔吸光度（A），根据A值判定药物对细胞增殖的影响。生长抑制率IR（%）=（1-B/A ）×100%（A、B分别为对照组和实验组的光密度值） 。
3.结果
4.讨论
在国内的有关研究中，首先是出现了大量关于水华问题的报道。由于水中氮、磷含量的急剧增加，导致水华在世界各地频频发生，成为了一个世界性的环境卫生问题[5]。该实验从某种程度上提出了一条整治蓝藻，解决这一环境卫生问题的新途径，即并非单纯的阻止工厂排放污水，而是换一个角度，从已经生长出来的蓝藻中挖掘其潜在的医学价值，使得人类不再过分的苦于怎样阻止蓝藻的生长，使水华问题得到有效解决。
从本实验结果来看，蓝藻提取物的确具有一定的医学价值，其浓度从10ug/ml开始以2倍的增幅依次往上递增，胃癌细胞的生长受抑制的程度逐渐增加，当提取物的浓度为160ug/ml时，生长抑制率达到所有实验组中的最大值，25.84%，后其浓度继续增大时，抑制的作用呈现出下降的趋势，即当浓度为320ug/ml时，细胞生长抑制率降低为8.24%。可见蓝藻提取物在一定浓度范围内对胃癌细胞的生长具有抑制作用，但是由于细胞生长抑制率未达到较高的值，因此在后续试验中可考虑在160ug/ml和320ug/ml两个浓度之间再增设几个浓度梯度以找到对胃癌细胞株生长抑制最有效的浓度作用值。
同时在此实验的基础上，对于蓝藻抑制胃癌细胞生长的机制也可作进一步的研究。从胃癌的形成的角度来看，比如幽门螺杆菌等可通过致胃黏膜上皮细胞增值加速、凋亡增加、基因表达异常等机制而出现胃肿瘤细胞[6]。从治疗的角度来看，有研究者对肿瘤细胞的凋亡过程作了进一步的研究，该过程是一个受半胱天冬酶和促凋亡蛋白共同作用的细胞死亡过程，而结论则是吡咯昔康和C-藻蓝蛋白合用比单一药物诱导细胞凋亡效果更加明显，因此可以从细胞凋亡的角度来研究蓝藻治疗胃癌的机制。同时对于蓝藻中的C-藻蓝蛋白，其还被报道具有抗炎抗癌的作用，起作用的有可能是重组体C-PC/β，它促进肿瘤细胞的凋亡和抑制它的生长。
参考文献：
[1]. 吕广鑫等.熊果酸对胃癌细胞株SGC7901的抑制作用 [J].牡丹江医学院学报，2011，32（4）：3-6
[2]. 寇冲.青年人胃癌100例分析 [J].内蒙古中医药，2010， 11：49-50
[3]. 杨苏等.滇池蓝藻资源综合利用的研究进展 [J].云南化工，2006， 33（3）：49-54
[4]. 李锦全等.藻类抗肿瘤物质活性研究进展 [J].海洋通报，2003， 22（1）：77-85
[5]. Huang Lei， Sun Kai， Ban Jie， Bi Jun. Public perception of blue-algae bloom risk in Hongze Lake of China [J]. Environmental management， 2010， 45（5）：1065-1075
[6].崔轶霞等.幽门螺杆菌致胃癌发生的机制研究进展 [J].现代肿瘤医学，2006，14（5）：625-627