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目的：对结核杆菌H37Rv的Rv0901基因进行体外扩增，构建基因打靶载体，利用基因打靶技术进行结核分支杆菌基因Rv0901功能的研究。方法：结核分支杆菌标准毒力株H37Rv体外培界，扩增目的基因，连接载体及目的片段，切除目的基因，筛选阳性克隆，酶切鉴定。结果：经酶切鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符，鉴定证实PCR产物及插入片段为所需目的基因片段，成功切除靶片段。证实标记基因插入片段插入方向正确。结论：成功构建了用于结核分支杆菌基因打靶的置换型载体，为随后将进行的Rv0901基因敲除株的建立，Rv