【摘 要】
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目的:建立一种快速、稳定、灵敏且可定量的检测马尔尼菲青霉病的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法。方法:根据马尔尼菲青霉ITS序列,设计并合成引物,通过常规PCR扩增目标序列后,将
【机 构】
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中山大学孙逸仙纪念医院皮肤性病科,南方医科大学第三附属医院皮肤科
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目的:建立一种快速、稳定、灵敏且可定量的检测马尔尼菲青霉病的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法。方法:根据马尔尼菲青霉ITS序列,设计并合成引物,通过常规PCR扩增目标序列后,将鉴定正确的目的基因片段克隆入pGEM-T载体中,转化大肠杆菌JM109,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线和溶解曲线,得出拷贝数与循环阈值之间的线性关系曲线表达式,并做灵敏性、特异性试验。结果:荧光定量PCR 标准曲线阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶
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