【摘 要】
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目的 探究miR-449b-5p通过调控NOTCH1基因的表达抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制.方法 实时荧光定量PCR、免疫印迹检测甲状腺乳头状癌细胞中miR-449b-5p和NOTC
【机 构】
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河南省商丘市第一人民医院病理科 476000
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目的 探究miR-449b-5p通过调控NOTCH1基因的表达抑制甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制.方法 实时荧光定量PCR、免疫印迹检测甲状腺乳头状癌细胞中miR-449b-5p和NOTCH1的表达,过表达miR-449b-5p,沉默或者过表达NOTCH1基因,检测细胞增殖、迁移和侵袭情况;双荧光素酶实验检测miR-449b-5p和NOTCH1的联系.结果 与Nthy-ori3-1细胞比较,甲状腺乳头状癌细胞BCPAP、TPC-1、K1中miR-449b-5p表达水平显著降低,NOTCH1mRNA及蛋白水平均显著升高(P<0.05);过表达miR-449b-5p后,与Control组、miR-NC组比较,miR-449b-5p组miR-449b-5p水平显著升高,NOTCH1水平显著降低,OD值、迁移、侵袭细胞数显著降低,CyclinD1、MMP-2蛋白水平显著降低,p21、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验显示,免疫印迹证实miR-449b-5p对NOTCH1的影响,miR-449b-5p可与NOTCH1结合负向调控NOTCH1水平;沉默NOTCH1后,与Control组、si-NC组比较,si-NOTCH1组NOTCH1蛋白水平显著降低,OD值、迁移和侵袭细胞数显著减少,CyclinD1、MMP-2蛋白水平显著降低,p21、E-cadherin蛋白水平显著升高(P<0.05);与miR-449b-5p+pcDNA3.1组比较,miR-449b-5p+pcDNA3.1-NOTCH1组NOTCH1水平显著升高,OD值、迁移和侵袭细胞数目显著升高,CyclinD1、MMP-2蛋白水平显著升高,p21、E-cadherin蛋白水平显著降低(P<0.05).结论 过表达miR-449b-5p抑制甲状腺乳头状癌细胞的增殖、迁移和侵袭,过表达NOTCH1基因能逆转过表达miR-449b-5p对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用.
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