【摘 要】
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目的探讨腺病毒E1A蛋白(E1A蛋白)对转录因子核因子-κB(NF-κB)、活化蛋白-1(AP-1)转录活性的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预作用。方法构建稳定表达E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞(E1A组)及对照质粒转染细胞(对照组),每组5×105个细胞,试验重复3次。采用脂多糖和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)进行刺激,NAC进行干预,荧光素酶报告基因检测系统分析核因子-κB和AP-
【机 构】
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510120 呼吸疾病国家重点实验室(广州医学院第一附属医院广州呼吸疾病研究所)(现在宁夏医科大学附属医院呼吸内科),广州医学院实验医学研究中心,510120 呼吸疾病国家重点实验室(广州医学院第一附
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目的探讨腺病毒E1A蛋白(E1A蛋白)对转录因子核因子-κB(NF-κB)、活化蛋白-1(AP-1)转录活性的影响以及抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预作用。
方法构建稳定表达E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞(E1A组)及对照质粒转染细胞(对照组),每组5×105个细胞,试验重复3次。采用脂多糖和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)进行刺激,NAC进行干预,荧光素酶报告基因检测系统分析核因子-κB和AP-1转录活性的变化,Western blot法检测核因子-κB和AP-1蛋白的表达。两个样本均数的比较采用t检验,多个样本均数的比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,
结果荧光素酶活性(相对光单位):刺激前E1A组为9 698±98,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为101 195±234和170 385±443,均明显高于对照组(2 077±107、67 846±332和95 743±211);刺激前转染AP-1的E1A组为9 034±78,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为26 343±398和31 731±332,均明显高于对照组(2 845±93、10 772±432和11 005±556)。细胞内核因子-κB蛋白表达(积分吸光度值):刺激前E1A组分别为79.3±4.6和80.3±3.8,在脂多糖和TNF-α刺激后分别为81.8±3.9~89.9±1.6和94.1±1.9~99.8±1.6,均明显高于对照组(刺激前分别为68.3±3.8和69.4±4.3,刺激后分别为70.1±2.8~80.8±3.6和73.4±4.9~83.2±6.7);在脂多糖和TNF-α作用后E1A组细胞核内AP-1蛋白表达的积分吸光度值(72±4~73±4和83±4~86±8)与对照组(71±4~74±7和84±6~86±6)无明显差别。给予NAC预处理后再用脂多糖和TNF-α刺激,E1A组核因子-κB蛋白表达的积分吸光度值(1.98±0.20和1.90±0.20)明显低于脂多糖或TNF-α单独作用组(3.20±0.10和3.30±0.10)。
结论腺病毒E1A蛋白持续表达可引起细胞内核因子-κB的过度活化,抗氧化物质NAC能明显拮抗E1A蛋白上调核因子-κB活化的作用,推测其机制可能与氧化应激有关。
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