【摘 要】
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【目的】为了培养用于X-衍射的酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ的蛋白晶体，为研究该酶的三维结构和功能打下基础；【方法】构建了表达酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段（Apa1dn
【机 构】
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同济大学生命科学与技术学院,中国科技大学生命学院
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（30670461）.致谢 感谢同济大学蛋白质研究所为本项目提供实验条件!
论文部分内容阅读
【目的】为了培养用于X-衍射的酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ的蛋白晶体，为研究该酶的三维结构和功能打下基础；【方法】构建了表达酿酒酵母二腺苷四磷酸磷酸解酶Ⅰ片段（Apa1dn16）的表达质粒，用核苷酸序列分析证明了克隆片段的正确性。将重组载体转化大肠杆菌表达菌株BL21（DE3），经IPTG诱导后，用SDS-PAGE检测了蛋白的表达情况。将粗蛋白用Ni-NTA亲和层析分离，收集组分进一步用Superdex 75分子筛纯化。纯化后的蛋白用SDS-PAGE和质谱检验其纯度和正确性，然后用悬滴气相扩散法进行了蛋
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