【摘 要】
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目的介绍彗星试验(Comet assay)方法,并运用其分析人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)及外周血淋巴细胞(Lymphocytes)DNA损伤水平与修复能力。方法将2BS或淋巴细胞悬液与1％低熔点琼
【机 构】
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首都医科大学宣武医院检验科,北京大学衰老研究中心,首都医科大学宣武医院心胸血管外科,
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目的介绍彗星试验(Comet assay)方法,并运用其分析人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)及外周血淋巴细胞(Lymphocytes)DNA损伤水平与修复能力。方法将2BS或淋巴细胞悬液与1％低熔点琼脂糖(LMA)等体积混合,铺于0．5％正常熔点琼脂糖(NMA)胶面上,细胞经充分裂解、电泳、PI染色后,用Leica图象分析系统每样本分析100个细胞彗距和彗尾面积。结果多数年轻与老龄2BS细胞、年轻与老龄人群淋巴细胞均无明显彗尾。28PD 2BS经H2O2损伤后彗尾明显,且彗距与彗尾面积随H2O2浓度升高而增大。批间(n=6)重复性实验显示,H2O2处理后细胞彗距s=1．7—3．5(μm)、CV=1．6％-2．8％,彗尾面积百分率s=1．5％-2．3％、CV=1．8％-2．5％。结论年轻与老龄细胞DNA单链断裂水平均较低。H2O2可明显损伤DNA,其损伤水平随H2O2浓度升高而加大,彗星试验是评价DNA损伤水平与修复能力的较好方法。
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