探讨博来霉素(BLM)和内毒素(LPS)对肺成纤维细胞增殖及表型转化的影响及可能机制。
方法分离、鉴定新生SD大鼠肺成纤维细胞,分为对照组、BLM组和LPS组。实验组加入不同浓度梯度的BLM(0.000 1、0.001、0.01、0.1、1 mg/L)和LPS(0.01、0.1、1、10、100 mg/L)。分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白含量。根据MTT结果进一步将BLM/LPS组分为低浓度组(分别为0.001、0.1 mg/L)和高浓度组(分别为1、10 mg/L),并且采用蛋白质印迹法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,透射电镜观察细胞超微结构,单细胞凝胶电泳检测DNA损伤。
结果HE染色显示原代培养的细胞呈成纤维细胞典型的纺锤形,免疫组织化学法鉴定示波形蛋白表达阳性。与对照组相比,在一定浓度范围内,BLM组和LPS组细胞增殖增高(P<0.05),且前者更显著;在较低浓度时,BLM组TGF-β1含量明显增高(P<0.05),随着浓度的增加,TGF-β1含量减少(P<0.05);而LPS各组TGF-β1含量比较差异无统计学意义。BLM/LPS低浓度组α-SMA蛋白表达增多(P<0.05);高浓度组α-SMA蛋白表达均明显减少(P<0.05),BLM组更显著。透射电镜显示,BLM低浓度组可见细胞核呈分叶状;BLM高浓度组细胞器明显水肿;LPS低浓度组和高浓度组均可见水肿的细胞器及分叶状细胞核。单细胞凝胶电泳结果显示,BLM与LPS低浓度组均可见明显彗星尾,二者彗星尾长差异无统计学意义;高浓度组彗星尾长进一步增加,且BLM组更明显。
结论在一定浓度范围内,BLM和LPS均可促进肺成纤维细胞增殖及表型转化,且前者作用明显强于后者;BLM和LPS均可致不同程度的肺成纤维细胞DNA损伤,这可能与肺成纤维细胞不同程度增殖及表型转化有关。