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[摘要] 目的 通过掌握和了解关于血凝检测的影响因素,为确保正确的临床治疗提供保障。方法 对血凝检测影响的各种因素进行分析。结果 严格执行正规操作要求,避免诸多不利因素的产生,确保检验结果准确性。结论 标本的采集与处理、试剂的使用、操作过程以及药物等其他因素均会对血凝检测结果产生影响,检验人员应掌握好熟练的操作技术,为临床服务提供准确的数据。
[关键词] 血凝检测;抗凝剂;影响因素
[中图分类号] R446.11 2[文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)12-83-02
血凝试验是临床工作中常用的检测项目,血凝检测结果的准确性是指导临床正确治疗的保障。血凝检测影响因素很多,如样本采集、运送、保存;试剂的使用、复溶、预温及储存;药物使用、监控、参考范围的确定;检验人员的熟练程度、是否正规操作等诸多因素都会导致检测结果误差。检验报告正确填写或输入检验报告的复核,其中每个环节都可能会影响检测结果。对各种影响检测结果作以下分析。
1标本采集与处理
1.1采血技术
1.1.1患者处于平静、空腹状态医务人员应帮助患者消除紧张情绪,避免血小板、凝血因子的激活;止血带不应拉得太紧,最好不要超过5min,必须顺利“一针见血”,避免混入组织液或发生溶血。因为组织液中会有丰富的因子Ⅷ,可激活外源性凝血途径,加速凝血酶原的消耗,使试验结果偏低。采血液与抗凝剂混匀,不宜用力振摇,避免用力振荡破坏凝血蛋白;宜采用真空采血管,可颠倒混匀。采血时有多管,宜采用第2管。采血时不能有气泡,气泡会使纤溶蛋白原、因子V、因子Ⅷ变性。
1.1.2试管要求一次性注射器,硅化玻璃管,要求2mL血量规格。
1.1.3抗凝剂选用常用的抗凝剂是枸橼酸钠。因为因子Ⅴ和因子Ⅷ在枸橼酸钠中稳定。不宜使用EDTA-2Na、肝素、草酸盐抗凝。肝素影响还适用于接受肝素治疗的病人的监测。而草酸盐能与钙离子形成不溶性沉淀物,影响血凝仪的光电终点。EDTA能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成纤维蛋白原单体聚合,且对因子Ⅴ保护性差。抗凝剂与全血的比例:抗凝剂与全血的比例为1∶9,不严格控制比例会改变血浆的钙离子浓度而影响结果(要求血量与采血管标本的体积差要≤10%)。
1.2标本保存[1]
标本保存受时间和温度影响,由于凝血因子易失活,室温条件下,试管加塞避免CO2扩散而使pH改变。血浆标本原则上应立即检测,血液一旦离体后即开始变化,随离体的时间不同凝血因子逐渐消耗,从而检测出的结果也不同。从标本采集起,PT 2h之内、TT 2h之内、APTT 2h之内完成检测。凝血试验在室温保存4h内完成,如果不能及时检测完成,放置4℃冰箱保存,24h内完成。不能完成将血浆放置在-20℃冷冻存放1周。试验PT血浆应于37℃快速融化,不要超过10min;TT试剂预温不宜超过30min,不能反复冻融。血液采集进入空器及进入实验所用时间越短,凝血因子保护越好。
1.3标本运送和处理
最好在实验室内采血,标本应随采随测,病房患者的标本尽快送到实验室,尽量减少运输和储存时间,防止日光直射,以避免凝血因子降低酶活性。
3000r/min离心10min,标本离心后如发现有溶血或小凝块应重抽,血中的乳糜微粒等将对血凝试验结果造成干扰,应通知临床医生。出现这种情况都严重影响结果。
2试剂使用及要求
不同的凝血活酶试剂有不同的最佳适用范围,应选用适合检测的仪器,适合本实验室目的凝血活酶,严格按照说明书使用,注意有效期和稳定性。取溶试剂使用后,立即放入冰箱2～8℃保存[2],每次使用要求混匀,发现试剂混浊立即遗弃。复溶后的试剂不能反复冻融。严格控制好APTT试剂中的CaCl2浓度。试剂使用中要注意污染的问题,避免试剂瓶盖错盖造成交叉污染;同一试剂用同一吸管或移液头,不能交叉使用,否则会造成试剂标本的交叉污染。
更换不同批号的凝血活酶和部分凝血酶试剂时,必须要检测正常对照。要建立本实验室的参考范围,每天做室内质控。
3操作的因素
操作技术对检验结果有很大的影响,某个环节不正确将会造成试验结果的明显变化。
检查仪器电源、光源是否稳定,预热时间或温度是否正确。温度过高过低都影响检验结果。检查所有试剂、缓冲液、标本是否合格,如发现问题及时纠正。
每次检测之前,应先检测质控血浆的数值,以确保检测结果的准确性。血浆预温不宜超过10min。加试剂时量要准确,要防止气泡的产生,有气泡时凝血时间会延长,出现错误的结果。加样器与反应杯垂直,加样时间要掌握好,加样动作要稳、准、快。既要让反应杯与感应器充分接触,又不能停顿时间过长。测定过程中应保持反应杯的清洁,防止异物掉入比色杯。
4药物和其他因素
药物本身影响凝血机制,如用肝素、华法林可抑制凝血酶,严重影响干扰凝血酶原试验,使凝血酶原时间延长。DIC患者在早期血液处于高凝状态,PT时间缩短,但在大量消耗凝血因子和产生的FDP拮抗凝酶的作用时,PI时间延长。
生理变化:妊娠、激动或剧烈运动精神紧张等因素都会影响凝血检测的结果。在凝血检测中,以上各种原因都会影响凝血检测结果。出现异常结果时,应联系咨询病情,诊断是否用抗凝药或在溶栓治疗,抽血是否顺利。检验人员收集标本一定要观察采血量,有无凝血块,离心后有无脂血,溶血观察血浆的颜色,不合格的标本退回重抽,否则会造成不正确的结果。只有掌握和了解各种不利因素,才能避免出现错误的结果。保证质量才能更好为临床服务,提供准确的数据。
[参考文献]
[1] 李立青. 标本放置时间及温度对凝血三项测定结果的影响[J]. 大理学院学报,2004,3(5):47.
[2] 肖秀林,陈红宇,王昌富,等. PT和APTT样本采集顺序和保存温度的探讨[J]. 上海医学检验杂志,2001,16(2):104.
[3] 刘颖燕,徐彩萍. 样本采集对凝血检测结果的影响[J]. 检验医学,2008,23⑴:202.
(收稿日期:2010-02-03)
[关键词] 血凝检测;抗凝剂;影响因素
[中图分类号] R446.11 2[文献标识码] A [文章编号] 1673-9701(2010)12-83-02
血凝试验是临床工作中常用的检测项目,血凝检测结果的准确性是指导临床正确治疗的保障。血凝检测影响因素很多,如样本采集、运送、保存;试剂的使用、复溶、预温及储存;药物使用、监控、参考范围的确定;检验人员的熟练程度、是否正规操作等诸多因素都会导致检测结果误差。检验报告正确填写或输入检验报告的复核,其中每个环节都可能会影响检测结果。对各种影响检测结果作以下分析。
1标本采集与处理
1.1采血技术
1.1.1患者处于平静、空腹状态医务人员应帮助患者消除紧张情绪,避免血小板、凝血因子的激活;止血带不应拉得太紧,最好不要超过5min,必须顺利“一针见血”,避免混入组织液或发生溶血。因为组织液中会有丰富的因子Ⅷ,可激活外源性凝血途径,加速凝血酶原的消耗,使试验结果偏低。采血液与抗凝剂混匀,不宜用力振摇,避免用力振荡破坏凝血蛋白;宜采用真空采血管,可颠倒混匀。采血时有多管,宜采用第2管。采血时不能有气泡,气泡会使纤溶蛋白原、因子V、因子Ⅷ变性。
1.1.2试管要求一次性注射器,硅化玻璃管,要求2mL血量规格。
1.1.3抗凝剂选用常用的抗凝剂是枸橼酸钠。因为因子Ⅴ和因子Ⅷ在枸橼酸钠中稳定。不宜使用EDTA-2Na、肝素、草酸盐抗凝。肝素影响还适用于接受肝素治疗的病人的监测。而草酸盐能与钙离子形成不溶性沉淀物,影响血凝仪的光电终点。EDTA能抑制或干涉纤维蛋白凝块形成纤维蛋白原单体聚合,且对因子Ⅴ保护性差。抗凝剂与全血的比例:抗凝剂与全血的比例为1∶9,不严格控制比例会改变血浆的钙离子浓度而影响结果(要求血量与采血管标本的体积差要≤10%)。
1.2标本保存[1]
标本保存受时间和温度影响,由于凝血因子易失活,室温条件下,试管加塞避免CO2扩散而使pH改变。血浆标本原则上应立即检测,血液一旦离体后即开始变化,随离体的时间不同凝血因子逐渐消耗,从而检测出的结果也不同。从标本采集起,PT 2h之内、TT 2h之内、APTT 2h之内完成检测。凝血试验在室温保存4h内完成,如果不能及时检测完成,放置4℃冰箱保存,24h内完成。不能完成将血浆放置在-20℃冷冻存放1周。试验PT血浆应于37℃快速融化,不要超过10min;TT试剂预温不宜超过30min,不能反复冻融。血液采集进入空器及进入实验所用时间越短,凝血因子保护越好。
1.3标本运送和处理
最好在实验室内采血,标本应随采随测,病房患者的标本尽快送到实验室,尽量减少运输和储存时间,防止日光直射,以避免凝血因子降低酶活性。
3000r/min离心10min,标本离心后如发现有溶血或小凝块应重抽,血中的乳糜微粒等将对血凝试验结果造成干扰,应通知临床医生。出现这种情况都严重影响结果。
2试剂使用及要求
不同的凝血活酶试剂有不同的最佳适用范围,应选用适合检测的仪器,适合本实验室目的凝血活酶,严格按照说明书使用,注意有效期和稳定性。取溶试剂使用后,立即放入冰箱2～8℃保存[2],每次使用要求混匀,发现试剂混浊立即遗弃。复溶后的试剂不能反复冻融。严格控制好APTT试剂中的CaCl2浓度。试剂使用中要注意污染的问题,避免试剂瓶盖错盖造成交叉污染;同一试剂用同一吸管或移液头,不能交叉使用,否则会造成试剂标本的交叉污染。
更换不同批号的凝血活酶和部分凝血酶试剂时,必须要检测正常对照。要建立本实验室的参考范围,每天做室内质控。
3操作的因素
操作技术对检验结果有很大的影响,某个环节不正确将会造成试验结果的明显变化。
检查仪器电源、光源是否稳定,预热时间或温度是否正确。温度过高过低都影响检验结果。检查所有试剂、缓冲液、标本是否合格,如发现问题及时纠正。
每次检测之前,应先检测质控血浆的数值,以确保检测结果的准确性。血浆预温不宜超过10min。加试剂时量要准确,要防止气泡的产生,有气泡时凝血时间会延长,出现错误的结果。加样器与反应杯垂直,加样时间要掌握好,加样动作要稳、准、快。既要让反应杯与感应器充分接触,又不能停顿时间过长。测定过程中应保持反应杯的清洁,防止异物掉入比色杯。
4药物和其他因素
药物本身影响凝血机制,如用肝素、华法林可抑制凝血酶,严重影响干扰凝血酶原试验,使凝血酶原时间延长。DIC患者在早期血液处于高凝状态,PT时间缩短,但在大量消耗凝血因子和产生的FDP拮抗凝酶的作用时,PI时间延长。
生理变化:妊娠、激动或剧烈运动精神紧张等因素都会影响凝血检测的结果。在凝血检测中,以上各种原因都会影响凝血检测结果。出现异常结果时,应联系咨询病情,诊断是否用抗凝药或在溶栓治疗,抽血是否顺利。检验人员收集标本一定要观察采血量,有无凝血块,离心后有无脂血,溶血观察血浆的颜色,不合格的标本退回重抽,否则会造成不正确的结果。只有掌握和了解各种不利因素,才能避免出现错误的结果。保证质量才能更好为临床服务,提供准确的数据。
[参考文献]
[1] 李立青. 标本放置时间及温度对凝血三项测定结果的影响[J]. 大理学院学报,2004,3(5):47.
[2] 肖秀林,陈红宇,王昌富,等. PT和APTT样本采集顺序和保存温度的探讨[J]. 上海医学检验杂志,2001,16(2):104.
[3] 刘颖燕,徐彩萍. 样本采集对凝血检测结果的影响[J]. 检验医学,2008,23⑴:202.
(收稿日期:2010-02-03)