【摘 要】
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目的 克隆牛乳源致病性金黄葡萄球菌nEBPS基因,经T程菌表达得到其编码抗原纯化蛋白,制备多克隆抗体,采用间接荧光抗体法鉴定nEBPS蛋白. 方法 设计1对克隆引物,PCR扩增牛乳腺
【机 构】
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内蒙古民族大学生命科学学院,内蒙古通辽028043;内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所
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目的 克隆牛乳源致病性金黄葡萄球菌nEBPS基因,经T程菌表达得到其编码抗原纯化蛋白,制备多克隆抗体,采用间接荧光抗体法鉴定nEBPS蛋白. 方法 设计1对克隆引物,PCR扩增牛乳腺炎金黄葡萄球菌内蒙古分离株EBPS基因序列,构建重组表达质粒,转化工程菌,表达膜表面亚单位蛋白nEBPS,纯化后免疫家兔制备抗nEBPS蛋白抗体,采用间接荧光抗体法对乳源致病性金黄葡萄球菌原生质体膜表面蛋白nEBPS进行亚细胞定位. 结果 在含25 μg/ml Amp、0.015 g/ml NaCl的LB液体培养基中成功培养制备了金黄葡萄球菌原生质体.对原生质体细胞(表面)和利用0.02 g/ml NaCl高渗溶液裂解原生质体细胞离心获得的细胞膜残片进行间接荧光抗体试验,均出现特异荧光.结论 间接荧光抗体试验鉴定nEBPS蛋白为膜表面蛋白,可作为乳及乳制品金黄葡萄球菌检测和制备免疫制剂的靶抗原.
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