粒细胞巨噬细胞集落刺激因子重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

来源 :空军总医院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yangmx198808
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本研究通过反转录PCR得到人GM-CSF基因片段后,通过重组pB220载体质粒的EcoRⅠ,BamHⅠ之间,构建了重组表达质粒phGM91。借助计算机分析,优化了构建质粒的转译起始区,采取定点诱变以消除SD序列和ATG区的强二级结构,提高了表达水平,将GM-CSF基因进行序列测定,与文献报导完全一致,所对应的氨基酸序列与天然氨基酸序列一致,将带有表达质粒phGM91的DH5α菌在42℃诱导,表达了预期的15KD的蛋白,约占菌体总蛋白的20%,并探讨了不同菌株对表达水平的影响,用MTT法测定所表达的GM-C
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