【摘 要】
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目的:探究miR-149-5p对人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞凋亡、上皮-间质转换(epithe-lial-mesenchymal transition,EMT)及微管形成的影响及作用机制.方法:miR-149-5p mimic(mimic)和pcDNA-FGF5(FGF5)单转或共转CAL-27细胞系,RT-PCR、Western blot检测FGF5表达;双荧光素酶报告实验验证miR-149-5p和FGF5靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡率,
【机 构】
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成都医学院第二附属医院·核工业四一六医院口腔科,成都610000;西南医科大学附属口腔医院牙周黏膜科,泸州646000;西南医科大学附属口腔医院修复科,泸州646000
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目的:探究miR-149-5p对人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞凋亡、上皮-间质转换(epithe-lial-mesenchymal transition,EMT)及微管形成的影响及作用机制.方法:miR-149-5p mimic(mimic)和pcDNA-FGF5(FGF5)单转或共转CAL-27细胞系,RT-PCR、Western blot检测FGF5表达;双荧光素酶报告实验验证miR-149-5p和FGF5靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测Bax/Bcl-2蛋白表达;观察EMT细胞形态转化,Western blot检测CAL-27细胞上皮标记物E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)及间质标记物N-钙黏蛋白(N-cadherin,N-cad)表达;成管实验检测CAL-27细胞微管样形成能力,Western blot检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达.结果:miR-149-5p mimic能明显抑制CAL-27细胞中FGF5的表达(P=0.000);miR-149-5p mimic能明显减弱FGF5野生质粒的荧光素酶活性(P=0.000);miR-149-5p mimic可明显上调CAL-27细胞凋亡率及Bax/Bcl-2比值(P=0.000),并逆转FGF5过表达导致的细胞凋亡率(P=0.014)及Bax/Bcl-2比值上调(P=0.000).miR-149-5p mimic抑制EMT细胞形态由圆形到纺锤形转变,并逆向转换FGF5过表达导致的间质样细胞形态.miR-149-5p mimic可上调CAL-27细胞中E-cad的表达(P=0.000)、下调N-cad的表达(P=0.000),逆转FGF5过表达引起的E-cad表达下调(P=0.020)和N-cad表达上调(P=0.000).miR-149-5p过表达能明显抑制CAL-27细胞微管结节形成(P=0.002),降低VEGF蛋白表达水平(P=0.000),逆转过表达FGF5引起的VEGF表达上调(P=0.000).结论:miR-149-5p能抑制OSCC细胞的EMT和微管形成能力并促进细胞凋亡,作用机制与靶向抑制FGF5表达有关.
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