【摘 要】
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【目的】通过将表面活性剂脱氧胆酸钠(Sodium deoxycholate,SD)与叠氮溴乙锭(Ethidium bromide monoazide,EMA)-PCR反应体系相结合,建立SD-EMA-PCR鉴别副溶血性弧菌死活细胞
【基金项目】
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辽宁省科技厅项目(No.201102196);沈阳市科技局项目(No.090009)
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【目的】通过将表面活性剂脱氧胆酸钠(Sodium deoxycholate,SD)与叠氮溴乙锭(Ethidium bromide monoazide,EMA)-PCR反应体系相结合,建立SD-EMA-PCR鉴别副溶血性弧菌死活细胞的检测方法。【方法】依次对加入检测体系中的脱氧胆酸钠最适浓度、EMA区分死活细胞DNA的浓度范围、EMA激活光解最佳曝光时间进行优化;确定SD-EMA-PCR方法检测副溶血性弧菌死活细胞混合体系中活细胞的最低检出限。【结果】当脱氧胆酸钠浓度≤0.5 g/L,EMA的浓度为3.2?34.0 mg/L,曝光时间为25 min时,SD-EMA-PCR检测体系仅对死细胞DNA扩增产生抑制作用。SD-EMA-PCR检测活菌细胞的最低检出限为10 CFU/mL。【结论】死活细胞混合体系的SD-EMA-PCR检测证明该方法能够明显降低EMA-PCR漏检的死菌对检测结果造成的影响,为完善食源性致病菌检测中死活菌细胞鉴别方法提供了一种有效途径。
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