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将在线恒电流电解产生ＣＩＯ＾－与流动注射化学发光分析法结合，基于甲氨蝶呤对ＣＩＯ＾－－鲁米诺体系化学发光的抑制作用，建立了甲氨蝶呤流动注射化学发光新方法。该法测定甲氨蝶呤质量浓度的线性范围为２×１０＾～４×１０＾２μｇ／Ｌ，检出限为１×１０μｇ／Ｌ，相对标准偏差为２．１％（８×１０μｇ／Ｌ，ｎ＝９），已应用于片剂和针剂中甲氨蝶呤的测定。该法具有简单、快速、灵敏等特点。