【摘 要】
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目的构建鼠源性乳腺癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞株,为研究乳腺癌耐药与体内免疫微环境的关系提供细胞模型。方法通过体外以浓度递增的方法诱导小鼠乳腺癌4T1细胞对5-Fu产生耐
【机 构】
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广州医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所广州市恶性肿瘤治疗转化医学重点实验室
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目的构建鼠源性乳腺癌5-氟尿嘧啶(5-Fu)耐药细胞株,为研究乳腺癌耐药与体内免疫微环境的关系提供细胞模型。方法通过体外以浓度递增的方法诱导小鼠乳腺癌4T1细胞对5-Fu产生耐药,MTS法确定其耐药性,平板克隆检测其增殖活性,实时定量和半定量PCR检测其中5-Fu代谢相关酶TS、MTHFR、TK、OPRT、DPD及药泵蛋白MDR1、MRP1的表达,通过流式细胞术检测其周期及CD44+CD24-干细胞亚群的比例。结果耐药细胞4T1/5-Fu与4T1细胞相比,4T1/5-Fu细胞对5-Fu、吉西他滨和顺铂耐药的耐药指数(RI)明显升高;5-Fu合成代谢相关酶TK、OPRT表达明显降低(P<0.05),代谢抑制性相关酶TS、MTHFR明显升高(P<0.05),药泵蛋白MDR1、MRP1表达明显升高(P<0.05);流式细胞术结果显示,CD44表达明显升高,肿瘤干细胞群增多。结论成功构建小鼠乳腺癌多药耐药细胞株,耐药发生可能与5-Fu代谢酶类、药泵蛋白表达以及干细胞比例改变相关。
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