【摘 要】
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为探究柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达载体-柞蚕蛹表达系统用于表达哺乳动物活性蛋白的可行性,利用该表达系统表达医用蛋白人生长激素(hGH).构建插入hgh基因的转移表达载体pA
【机 构】
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辽宁省农业科学院大连生物技术研究所,辽宁省野蚕重点实验室,辽宁大连116024
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为探究柞蚕核型多角体病毒(ApNPV)表达载体-柞蚕蛹表达系统用于表达哺乳动物活性蛋白的可行性,利用该表达系统表达医用蛋白人生长激素(hGH).构建插入hgh基因的转移表达载体pApM748BE/hgh,将该转移表达载体质粒DNA与病毒ApNPV-△ph/egfp+基因组DNA共转染樗蚕(Philosamia cynthiam)培养细胞Pc-01,用末端稀释法筛选获得重组病毒ApNPV-△ph/ △egfp/hgh+,采用Western blotting和ELISA方法,检测到柞蚕蛹感染重组病毒ApNP V-△ph/ △egfp/hgh+后第7天体液中就有hGH明显表达;感染后第13～ 14天蛹体液中的hGH含量保持较高水平,重组hGH的最高表达量可达251.18μg/mL;感染后第15～20天仍可以检测到hGH的表达,但表达产物出现降解现象.用活化的人红白血病细胞K562检测利用ApNPV表达载体系统在柞蚕蛹表达的重组hGH的体外活性,结果显示其对K562细胞的增殖具有明显的促进作用.
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