目的:应用ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL 4条DNA条形码区分白头翁药材及混伪品(委陵菜、翻白草、白鼓钉)。方法:提取样品总DNA,对目的条带进行PCR扩增和双向测序获得序列。通过软件MEGA6.06对序列进行比对、遗传距离分析和进化树构建。采用相似性搜索法(BLAST)评估各序列鉴定成功率。结果:4条DNA条形码最大种内遗传距离均远小于其与混伪品的最小种间遗传距离,PCR扩增效率和测序成功率均为100%,ITS2序列种、属水平鉴定成功率均为100%;进化树显示ITS2、psbA-trnH与matK序列能有效将白头翁药材及混伪品明显区分开,而rbcL序列仅可鉴别出白鼓钉,且ITS2、psbA-trnH从种水平上对白头翁的鉴定能力大于matK序列。结论:ITS2与psbA-trnH序列可对白头翁及混伪品进行鉴别,确认了条形码在白头翁及混伪品中的普适性,为质量标准建立提供了依据。