【摘 要】
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以菌丝霉素成熟肽经大肠杆菌密码子优化后的基因为基础,采用易错PCR技术,使用低保真的Taq酶,调整Mg2+浓度、添加Mn2+,改变PCR扩增程序,获得易错PCR产物.经克隆、转化后,挑取2
【机 构】
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中国医药工业研究总院上海医药工业研究院,上海,200437
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以菌丝霉素成熟肽经大肠杆菌密码子优化后的基因为基础,采用易错PCR技术,使用低保真的Taq酶,调整Mg2+浓度、添加Mn2+,改变PCR扩增程序,获得易错PCR产物.经克隆、转化后,挑取200株突变体进行测序鉴定,并进行抑菌活性筛选,筛得突变体M-1.基因比对结果显示,突变体M-1中有1个碱基发生突变,使得31位氨基酸由丙氨酸(Ala)变成精氨酸(Arg).蛋白质分子空间结构模拟显示,突变位点位于蛋白质的β折叠上,靠近活性中心,氨基酸残基由疏水性变成极性,推测更有利于与lipid Ⅱ的特异性结合,增强抑菌活性.本研究还对突变体小肽M-1进行了分离纯化.抑菌活性试验表明,突变体小肽M-1的抑菌活性是菌丝霉素的2倍.
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