【摘 要】
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目的:建立叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的人正常肝细胞系L02自噬模型并探讨其中的线粒体应激机制。方法:体外培养L02细胞,用不同浓度(100、200、400、800、1 000μmol/L)t-BHP
【机 构】
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第四军医大学预防医学院毒理学教研室,第四军医大学预防医学院营养与食品卫生学教研室,陕西省自由基生物学与医学重点实验室
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目的:建立叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导的人正常肝细胞系L02自噬模型并探讨其中的线粒体应激机制。方法:体外培养L02细胞,用不同浓度(100、200、400、800、1 000μmol/L)t-BHP及线粒体靶向抗氧化剂Mito Q或p38/MAPK特异性抑制剂SB203580进行处理,采用免疫荧光和Western blot检测自噬标志蛋白LC3-II和p62蛋白水平,以及p38/MAPK信号通路的激活情况;Mito-SOX Red染色流式法检测细胞线粒体活性氧(ROS)水平。结果:免疫荧光结果显示t-BHP剂量≥800μmol/L时可明显诱导L02细胞内LC3-II发生聚集。Western blot结果显示,与对照组比较,800和1 000μmol/L t-BHP处理可显著增加LC3-II蛋白水平,并降低p62蛋白水平(P均<0.05)。同时线粒体ROS水平在≥400μmol/L t-BHP处理后明显升高,在1 000μmol/L t-BHP处理后p38蛋白磷酸化水平显著增加(P均<0.05)。给予线粒体靶向抗氧化剂Mito Q或p38/MAPK特异性抑制剂SB203580预处理后可有效拮抗t-BHP(1 000μmol/L)处理引起的LC3-II和p62蛋白水平改变。结论:我们成功建立了t-BHP诱导体外培养人正常肝细胞系L02的自噬模型,证明线粒体ROS介导了此过程的发生,同时p38/MAPK通路在此过程中发挥了重要作用。
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