【摘 要】
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为了提高蛋白质组的覆盖率,色谱分离将发挥重要作用,而色谱固定相更是关键.为此,本文采用"硫醇-烯"点击化学的方法制备了一种反相/弱阳离子交换混合模式色谱填料,期望通过其
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院生命组学研究所蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组学研究中心国家蛋白质科学中心(北京); 北京安必奇生物科技有限公司;
【基金项目】
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国家重点研发计划(批准号:2017YFA0505002,2016YFA0501403,2016YFA0501300);国家重大科学仪器设备开发专项(批准号2012YQ12004407,2013YQ14040506)资助
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为了提高蛋白质组的覆盖率,色谱分离将发挥重要作用,而色谱固定相更是关键.为此,本文采用"硫醇-烯"点击化学的方法制备了一种反相/弱阳离子交换混合模式色谱填料,期望通过其对多肽混合物的高效分离提高蛋白质质谱鉴定的覆盖率.为了对制备的混合物模式色谱填料的性能进行评价和应用,首先采用小分子混合物对制备的混合模式色谱填料进行表征,结果表明,这种填料具有反相和弱阳离子交换两种分离机制;再用这种混合模式色谱填料分离6条疏水性和理论等电点不同的标准肽段混合物,可将这6条肽段完全分离,而经典的C18反相色谱柱则不能将它们完全分离,说明对于疏水性质相似的肽段,可以根据其等电点的差异得到更好的分离,且由于在反相基团与基质间嵌合了具有亲水性质的基团,减弱了固定相的疏水性质,从而减弱了强疏水性肽段的不可逆吸附的作用.最后将这种固定相用于全蛋白酶切物的混合模式色谱离线分离结合反相色谱-串联质谱分析,对100μg Hep-G2细胞全蛋白酶切物进行分析,共鉴定到5924个蛋白,表明这种混合模式的色谱填料可用于蛋白质组的分离分析中.
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