【摘 要】
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目的 确定原核表达系统中人类乳头瘤病毒6型（human papillomavirus 6,HPV6）L1蛋白的最佳表达条件，并对HPV6 L1 VLP免疫小鼠后产生的中和抗体水平进行评价。方法 将密码子优化的HPV6 L1基因片段与原核表达载体pET30a（+）连接，构建重组表达质粒pET30a-6L1，在大肠埃希菌中表达HPV6 L1蛋白，并通过添加分子伴侣（TF、GroES-GroEL、Dna
【基金项目】
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吉林省发改委产业自主创新能力专项-蛋白质工程创新技术平台（2019C006）；
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目的 确定原核表达系统中人类乳头瘤病毒6型（human papillomavirus 6,HPV6）L1蛋白的最佳表达条件，并对HPV6 L1 VLP免疫小鼠后产生的中和抗体水平进行评价。方法 将密码子优化的HPV6 L1基因片段与原核表达载体pET30a（+）连接，构建重组表达质粒pET30a-6L1，在大肠埃希菌中表达HPV6 L1蛋白，并通过添加分子伴侣（TF、GroES-GroEL、DnaK-DnaJ-GrpE）筛选能够增加目的蛋白表达的最佳条件。将表达的HPV6 L1蛋白经密度梯度离心、阳离子交换层析后获得纯化蛋白，对其形态进行表征。将纯化的HPV6 L1 VLP免疫BALB/c小鼠，采用假病毒中和试验检测小鼠血清中和抗体水平。结果 质粒pET30a-6L1经双酶切鉴定证明构建正确；添加TF分子伴侣时HPV6 L1蛋白表达量最高；HPV6 L1 VLP是呈均一的、直径45～65 nm的球状结构，与HPV6天然病毒颗粒的形态、大小相似；HPV6 L1 VLP初次免疫小鼠第8周，血清抗体水平达到峰值，为105以上。结论 分子伴侣TF促进了HPV6 L1蛋白的可溶性表达，纯化后的目的蛋白免疫原性良好。本研究为后续各型别HPV L1蛋白表达工艺的探索提供了思路，也为下一步的中试扩大培养奠定了基础。
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