【摘 要】
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目的 制备新型阳离子脂质体–siRNA复合物,并探讨其对K562细胞凋亡的诱导作用及作用机制。方法通过逆向蒸发技术制备阳离子脂质体复合物,以K562细胞为模型,使用不同浓度的脂质体–siRNA复合物转染K562细胞,MTT法测定脂质体–siRNA复合物对K562细胞生长的影响,流式细胞术检测脂质体–siRNA复合物对K562细胞周期的影响,反转录聚合酶链反应(reverse transcripti
【基金项目】
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河南省科技厅项目(182102311244);
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目的 制备新型阳离子脂质体–siRNA复合物,并探讨其对K562细胞凋亡的诱导作用及作用机制。方法通过逆向蒸发技术制备阳离子脂质体复合物,以K562细胞为模型,使用不同浓度的脂质体–siRNA复合物转染K562细胞,MTT法测定脂质体–siRNA复合物对K562细胞生长的影响,流式细胞术检测脂质体–siRNA复合物对K562细胞周期的影响,反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT–PCR)和蛋白质印迹法检测脂质体–siRNA复合物对K562细胞相关m RNA及蛋白表达的影响。结果 与对照组相比,脂质体–siRNA复合物转染K562细胞增殖受到明显抑制,流式细胞术检测结果显示,阻滞于G1期细胞明显增多(P<0.05),而S期和G2/M期细胞显著减少(P<0.05),RT–PCR和蛋白质印迹法结果显示,随着脂质体–siRNA复合物浓度的增加,K562细胞中bcl–2蛋白及m RNA表达水平均显著降低(P<0.05),bax、caspase–3蛋白及m RNA表达水平均显著升高(P<0.05)。结论 新型脂质体–siRNA复合物转染率高,且沉默效果显著,可下调bcl–2基因,上调bax、caspase–3基因,进而促进K562细胞凋亡,有望成为慢性粒细胞白血病基因治疗的高效药物传递系统。
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