【摘 要】
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目的:考察抑肝散提取物抑制环境内分泌干扰物(EEDs)双酚A(BPA)和邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(DEHP)神经毒性的作用并分析其机制.方法:小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2a细胞经BPA(0.1 mmol/L)+DEHP(0.1 mmol/L)与3 mg/mL(低剂量组)和6 mg/mL(高剂量组)抑肝散乙醇/氯仿提取物共培养72 h,观察细胞凋亡和氧化损伤(活性氧簇,ROS)的变化.按照暴露剂量为25μg/(kg·d)BPA和50μg/(kg·d)DEHP给予初断乳雄性Sprague-Dawle
【机 构】
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天津医科大学第二医院药学部,天津300211;天津市海 河医院检验科,天津300350
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目的:考察抑肝散提取物抑制环境内分泌干扰物(EEDs)双酚A(BPA)和邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(DEHP)神经毒性的作用并分析其机制.方法:小鼠神经母细胞瘤细胞Neuro-2a细胞经BPA(0.1 mmol/L)+DEHP(0.1 mmol/L)与3 mg/mL(低剂量组)和6 mg/mL(高剂量组)抑肝散乙醇/氯仿提取物共培养72 h,观察细胞凋亡和氧化损伤(活性氧簇,ROS)的变化.按照暴露剂量为25μg/(kg·d)BPA和50μg/(kg·d)DEHP给予初断乳雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠BPA连续灌胃暴露90 d,同时将抑肝散乙醇/氯仿提取物按300 mg/kg(低剂量组)和600 mg/kg(高剂量组)给大鼠灌胃给药,通过Y迷宫实验观察大鼠短期记忆能力(自发交替正确率)的变化.取大鼠海马组织后,检测海马组织总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、游离脂肪酸(FFAs)葡萄糖含量和线粒体膜电位(MMP)的变化,分析星形胶质细胞胶质纤维状酸性蛋白(GFAP)和巢蛋白(nestin)、caspase-3以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路活性的变化.结果:Neuro-2a细胞经BPA+DEHP暴露后,24、48、72 h细胞增殖均受到抑制(t=3.951、8.823、7.060,均P<0.05),早期和晚期凋亡率均上调(t=14.072、6.590,均P<0.05),抑肝散提取物可促进细胞增殖(与暴露组相比,低剂量组t=2.963、5.814、2.101,均P<0.05,高剂量组t=3.796、10.370、5.311,均P<0.05),抑制早期和晚期细胞凋亡(与暴露组相比,低剂量组t=0.770、1.475,均P<0.05,高剂量组t=6.187、4.368,均P<0.05).大鼠经BPA+DEHP暴露后,短期记忆能力显著下降(t=2.123,P<0.05),其海马组织氧化应激、GFAP表达和caspase-3活性上调(t=3.634、5.043、8.914,均P<0.05),nestin表达、线粒体膜电位、MDA、GSH、T-AOC和mTOR磷酸化水平下调(t=8.398、9.979、3.754、9.621、7.193、25.982,均P0.05,高剂量组t=2.293,P<0.05)以及海马组织的上述表型改变(与暴露组相比,低剂量组t=1.147、1.683、1.594、1.611、4.469、2.070、5.346、5.499、6.124,除MDA外均P<0.05,高剂量组t=2.642、3.385、3.728、4.899、8.083、3.719、4.707、5.761、12.252,均P<0.05).结论:抑肝散提取物可通过调节氧化应激和糖代谢紊乱,抑制EEDs的神经毒性.
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