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为了对牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）和牛病毒性腹泻病毒（BVDV）同时进行检测，提高检测效率，根据IBRV gE基因序列（GenBank登录号：L27212.1)和BVDV 5′端非编码区序列（GenBank登录号：AY278459.1）的保守区域，分别设计1对IBRV的特异性引物和1对BVDV的特异性引物，建立用于IBRV和BVDV的双重纳米PCR（Nano-PCR）检测方法。特异性试验结果显示，该方法对牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛轮状病毒和牛冠状病毒均无交叉反应，表明该方法的特异性良好。敏感性试验结果显示，该方法的最低检测量为10 fg/μL，是普通PCR的10倍，表明该方法的敏感性良好。特异性试验与敏感性试验均进行3次重复，结果一致，重复性良好。用建立的方法对38份临床样品进行检测，IBRV、BVDV及IBRV与BVDV的共感染阳性率分别为5.26% 44.74%和2.63%。综上所述，本研究中建立的Nano-PCR方法可用来对临床样品的快速诊断和检测，具有特异性强、灵敏度高、重复性好的优点。