含编码人乳头瘤病毒18型L1蛋白基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的条件优化

来源 :国际生物制品学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yesw04
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目的 确定以昆虫细胞sf9扩增含编码人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)18型L1蛋白(HPV18 L1)基因的杆状病毒以及相应蛋白表达的最佳条件.方法 以对数生长期的sf9细胞在不同感染复数(MOI)和不同时间条件下扩增病毒,以蚀斑试验检测病毒滴度,选择获得最高滴度病毒的最佳条件;再以sf9细胞在不同细胞密度、不同MOI值和不同时间条件下表达相应蛋白,以蛋白印迹法鉴定并比较不同条件下的蛋白表达量,选择获得最大量目的 蛋白的最佳条件.结果 对数生长期的sf9细胞在MOI值为0.50、扩增时问为48 h时,所扩增的病毒滴度最高,可达3×108 pfu/ml;在细胞密度为3×106/ml、MOI值为2.0、表达时间为72 h时,所表达的蛋白量最大,约5 mg/L.结论 确定了含编码HPV18 L1基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的最佳条件。

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