建立快速、灵敏的LC-MS/MS法测定人血浆中诺氟沙星的浓度,并将该方法应用于诺氟沙星在人体内的药代动力学研究。以环丙沙星为内标,血浆样品经甲醇沉淀后,通过Symmetry^?C18色谱柱（100 mm×4.6 mm,5μm）进行分离,使用甲醇溶液（含0.3%甲酸）-水溶液（含0.3%甲酸和5%甲醇）作为流动相,进行梯度洗脱,流速为0.45 mL·min^-1。通过电喷雾电离源（ESI）,以多反应监测（MRM）模式进行正离子检测,诺氟沙星、环丙沙星的MRM离子对分别为m/z 320.3→302.1、m/z 332.3→314.1。人血浆中诺氟沙星在10～1 000 ng·mL^-1浓度内线性关系良好（r²>0.99）,定量下限为10 ng·mL^-1;定量下限和质控样品的批内、批间精密度（RSD%）在2.64%～7.23%之间,准确度（RE%）在±5.00%以内。健康人口服诺氟沙星片100 mg后主要药代动力学参数t_max、C_max、AUC_0-t、t_1/2分别为:1.28±0.364 h、627±171 ng·mL^-1、2 938±850 h·ng·mL^-1、6.01±1.36 h。本研究建立的LC-MS/MS分析方法灵敏度高且样品处理方法简单快速,满足生物分析的法规要求,经柳州市工人医院医学伦理委员会的批准,可应用于人体内诺氟沙星的药代动力学研究。