探讨妊娠合并系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者中长链非编码RNA核富含丰富的转录本1(long noncoding RNA nuclear-enriched abundant transcript 1,lncRNA NEAT1)介导的表观修饰调控辅助性T细胞2(Th2)分化发育的作用及其机制。
方法选取2014年7月1日—2019年7月1日在河南省人民医院生产的正常单胎妊娠患者11例及妊娠合并SLE患者15例,收集外周血单个核细胞,qPCR检测NEAT1 mRNA表达水平。ELISA和流式细胞术检测IFN-γ和IL-4蛋白质表达水平。流式细胞术分选初始CD4+T细胞,RNA结合蛋白免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)技术检测组蛋白甲基转移酶(EZH2)与NEAT1结合情况。干扰NEAT1表达后,实时定量聚合酶链反应技术(real time quantity polymerase chain reaction,RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测泛素E3连接酶(ITCH)的mRNA和蛋白质表达水平。运用染色质免疫沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)技术检测妊娠合并SLE患者EZH2在ITCH启动子区的募集。过表达NEAT1和ITCH,ELISA检测IL-4蛋白质水平。采用t检验进行数据统计学分析。
结果妊娠合并SLE患者外周血NEAT1 mRNA水平显著高于正常妊娠对照组。妊娠合并SLE患者IFN-γ水平显著降低,IL-4水平显著上调。妊娠合并SLE患者初始CD4+ T细胞中,NEAT1与EZH2结合显著高于对照组。干扰NEAT1表达以后,ITCH的mRNA和蛋白质水平显著升高。ChIP分析发现,妊娠合并SLE患者中,EZH2在ITCH启动子区的募集也显著上调;ITCH能够显著抑制初始CD4+T细胞中IL-4的产生,而过表达NEAT1则能够上调IL-4的蛋白质水平。
结论妊娠合并SLE患者NEAT1水平显著升高,NEAT1招募EZH2到ITCH启动子区,促进初始CD4+T细胞发育分化为Th2细胞,导致Th1/Th2失衡,从而影响妊娠合并SLE的疾病进程。