【摘 要】
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目的:探讨以重组2型腺相关病毒(AAV2)介导锰超氧化物歧化酶(MnSOD)高表达对耳蜗血管纹缘细胞氧化损伤的作用及机制.方法:体外培养耳蜗血管纹缘细胞(MCs),分为实验组、对照组
【机 构】
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武汉市妇女儿童医疗保健中心,华中科技大学同济医学院附属协和医院耳鼻咽喉科
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目的:探讨以重组2型腺相关病毒(AAV2)介导锰超氧化物歧化酶(MnSOD)高表达对耳蜗血管纹缘细胞氧化损伤的作用及机制.方法:体外培养耳蜗血管纹缘细胞(MCs),分为实验组、对照组及正常组.实验组按感染复数(MOI)为104v·g/cell感染rAAV2- MnSOD-EGFP,同时感染rAAV2-EGFP作对照组及不作处理缘细胞为正常组.荧光显微镜下观察MCs绿色荧光蛋白(EGFP)的表达情况及免疫印迹法(western blot)分析转染后MnSOD的表达水平.实验组及对照组同时暴露于400 μmol/L H2O2 2 h,24 h后比色法测定各组丙二醛(MDA )含量;流式细胞PI荧光标记检测细胞凋亡率;Western blot 检测凋亡因子Caspase-3活化片段Cleaved caspase-3的表达.结果:①各组MCs感染病毒后,生长正常,实验组感染rAAV2- MnSOD-EGFP后4d出现EGFP的表达,10 d至高峰;且持续细胞体外生长的整个周期.实验组MnSOD的表达及活性明显高与对照组及正常组,差异有统计学意义(P
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