【摘 要】
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目的 构建人野生型和突变型血小板糖蛋白Ⅲa(GPⅢa)真核表达重组质粒PeDNA3.1(+)Ⅲa和PeDNA3.1(+)ⅢanT1565C.方法 选择人红白血病细胞提取人基因组总RNA,经过逆转录-聚合酶
【机 构】
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哈尔滨医科大学附属第二医院内分泌科
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目的 构建人野生型和突变型血小板糖蛋白Ⅲa(GPⅢa)真核表达重组质粒PeDNA3.1(+)Ⅲa和PeDNA3.1(+)ⅢanT1565C.方法 选择人红白血病细胞提取人基因组总RNA,经过逆转录-聚合酶链反应后,采用定点诱变技术,通过三轮聚合酶链式反应将第2外显子1565位基因由T置换为C,把最终产物与质粒peDNA3.1(+)连接,构建突变型质粒PeDNA3.1(+)Ⅲa.结合同时构建的野生型PcDNA3.1(+)Ⅲa,采用阳离子脂质体法进行共转染到CHO细胞中,通过流式细胞术鉴定野生型和突变型PcDNA3.1(+)Ⅲa在CHO细胞的表达情况.结果 通过DNA测序,成功获得人野生型和突变型PeDNA3.1Ⅲa重组质粒,转染至CHO经FCM检测均有GPⅢa表达.结论 ①成功构建了野生型和突变型真核表达载体PcDNA3.1(+)Ⅲa和PcDNA3.1(+)Ⅲa T1565C;②获得野生型和突变型GPⅢa的CHO细胞系.
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