EphA2调控头颈部鳞状细胞癌血管新生及转移的体内实验

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目的

研究EphA2对头颈部鳞状细胞癌(简称鳞癌)血管新生及颈淋巴转移的影响.

方法

利用慢病毒介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)沉默EphA2在高转移性头颈鳞癌细胞株M2中的表达,嘌呤霉素筛选稳定克隆,反转录PCR及Western blot技术检测EphA2沉默效果;构建头颈鳞癌高转移动物模型,通过HE染色验证其成瘤及颈淋巴转移情况;免疫组织化学技术检测移植瘤微血管密度,Western blot技术检测移植瘤标本中EphA2及血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况.

结果

筛选出EphA2基因稳定沉默的M2细胞(定义为M2 EphA2 RNA+即实验组),并成功构建头颈鳞癌高转移动物模型,成瘤率达100%.25 d后,实验组移植瘤体积为(430.7±190.0) mm3(x±s,以下同)较对照组的(1179.0 ±289.4) mm3明显减少(t =5.597,P<0.01),质量显著减轻(t=-4.560,P<0.05),且双侧颈淋巴转移率明显降低(Mann-Whitney U=10.0,P<0.05).Western blot 显示实验组移植瘤组织中EphA2及VEGF蛋白表达显著下调,免疫组织化学技术发现实验组瘤体微血管密度为(4.74±0.67)个/视野,显著少于对照组的(14.17±0.59)个/视野(t=26.751,P<0.01).

结论

EphA2沉默能抑制头颈部鳞癌细胞的生长及转移,并能明显减少头颈部鳞癌组织内的肿瘤新生血管,且该肿瘤新生血管的抑制可能与促血管生成因子VEGF的减少有关.

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