【摘 要】
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目的:探究胃癌外泌体lncRNA CASC11对M2型巨噬细胞极化的影响及机制.方法:人单核细胞THP-1加入PMA诱导其分化为M0型巨噬细胞,M0型巨噬细胞和胃癌细胞MGC-803中转染空白质粒(Vector组)和lncRNA CASC11过表达质粒(lncRNA CASC11组),qRT-PCR转染后巨噬细胞中iNOS、CD16、CD206、Arg-1、Ym1、TNF-α、IL-1β、TGF-β 和IL-10 mRNA的表达,流式细胞术检测CD206+CD14+细胞比例.提取人胃粘膜细胞GES-1、人
【机 构】
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海南医学院第一附属医院消化内科, 海南 海口 570102;中国医科大学附属第一医院内镜科, 辽宁 沈阳 110001
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目的:探究胃癌外泌体lncRNA CASC11对M2型巨噬细胞极化的影响及机制.方法:人单核细胞THP-1加入PMA诱导其分化为M0型巨噬细胞,M0型巨噬细胞和胃癌细胞MGC-803中转染空白质粒(Vector组)和lncRNA CASC11过表达质粒(lncRNA CASC11组),qRT-PCR转染后巨噬细胞中iNOS、CD16、CD206、Arg-1、Ym1、TNF-α、IL-1β、TGF-β 和IL-10 mRNA的表达,流式细胞术检测CD206+CD14+细胞比例.提取人胃粘膜细胞GES-1、人胃癌细胞株MGC-803、SGC7901、MKN45以及Vector和lncRNA CASC11组MGC803细胞所分泌的外泌体(GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo、SGC7901 exo、Vector exo、CASC11exo),qRT-PCR检测lncRNA CASC11在GES-1、MGC-803、SGC7901、MKN45细胞、转染后的MGC-803细胞及其外泌体中的表达.将PBS、GES-1 exo、MGC-803 exo、MKN45 exo、SGC7901 exo、Vector exo、CASC11exo与M0型巨噬细胞共孵育后,qRT-PCR检测细胞中ln-cRNA CASC11、iNOS、CD16、CD206、Arg-1、Ym1、TNF-α、IL-1β、TGF-β和IL-10的表达,CD206+CD14+细胞比例,Western blot检测TLR4表达以及NF-κB磷酸化水平.结果:lncRNA CASC11在胃癌细胞及其外泌体中均高表达.相比于Vector组,lncRNA CASC11组巨噬细胞中iNOS、CD16、TNF-α 和IL-1β表达显著下调,CD206、Arg-1、Ym1、TGF-β和IL-10表达显著上调,CD206+CD14+细胞比例显著增加.相比于PBS组,MGC-803 exo、MKN45 exo和SGC7901 exo组巨噬细胞中iNOS、CD16、TNF-α 和IL-1β表达显著下调,lncRNA CASC11、CD206、Arg-1、Ym1、TGF-β 和IL-10表达显著上调,CD206+CD14+细胞比例显著增加,TLR4表达以及NF-κB磷酸化水平均显著减少.相比于Vector exo,CASC11 exo中ln-cRNA CASC11表达显著增加,相比于Vector exo组细胞,CASC11 exo组巨噬细胞中iNOS、CD16、TNF-α和IL-1β表达显著下调,lncRNA CASC11、CD206、Arg-1、Ym1、TGF-β 和IL-10表达显著上调,CD206+CD14+细胞比例显著增加,TLR4表达以及NF-κB磷酸化水平均显著减少.结论:胃癌外泌体lncRNA CASC11抑制TLR4/NF-κB信号通路而诱导M2型巨噬细胞极化.
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