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【目的】建立一种快速、灵敏的舒伯特气单胞菌（Aeromanas schubertii）检测方法。【方法】以舒伯特气单胞菌rpoD (RNA polymerase sigma 70 factor)为靶标基因，设计特异性引物及 TaqMan探针，建立舒伯特气单胞菌的TagMan实时荧光定量PCR检测方法，同时验证该方法的特异性、灵敏度、重复性，并用该方法对50份临床样品进行检测，验证其应用效果。【结果】含舒伯特气单胞菌rpoD基因的质粒拷贝数与循环阈值（CT）的标准曲线相关系数为1.000，扩增效率为94.705%。实时荧光定量PCR检测方法只对舒伯特气单胞菌的靶基因检测结果呈阳性，对嗜水气单胞菌(Aeromanas hydrophila)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)、温和气单胞菌(Aeromonas sobria)、诺卡氏菌(Nocardia seriolae)等其他14种致病菌的检测结果均为阴性，具有高度特异性；对舒伯特气单胞菌重组质粒和纯培养细菌的检出灵敏度分别为4.76拷贝/μL和15 CFU/mL；批内和批间重复性试验变异系数分别为0.95%和1.05%。50份临床样品检测结果显示，该方法阳性样品检出率为22%，高于传统细菌分离方法（10%）的检出率。【结论】建立的舒伯特气单胞菌荧光定量PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好，适用于舒伯特气单胞菌的快速诊断检测和流行病学调查。