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【摘 要】 幽门螺杆菌感染与慢性胃炎、消化道溃疡、胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤等密切相关。人们对幽门螺杆菌感染的早期诊断日益重视，其检测技术也在不断发展。为人们更好地选择各种检测方法，现对目前幽门螺杆菌实验室诊断方法及其进展进行综述。
【关键词】 幽门螺杆菌 检测方法
幽门螺杆菌，Helicobacter pylori，简称Hp，是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌。长2.5～4.0μm，宽0.5～1.0μm。在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。1994年，世界卫生组织将幽门螺杆菌列为第一类高危致恶变因子，幽门螺杆菌具有极强的传染性，人是幽门螺杆菌的唯一传染源。家庭成员中的感染者一经确诊，就必须主动接受正规的抗菌治疗，彻底清除传染源以达到防治目的，只有先查出是否感染幽门螺杆菌，再进行有效的根治，才能彻底治愈。自1983年通过胃镜取活检标本分离培养成功以来，对Hp感染的诊断已发展出了许多方法，包括有细菌学、病理学、血清学、同位素示踪、分子生物学等.由于各种方法的价格、目的、意义、要求、仪器各不相同，为了使人们能更好地选择检测方法，现综述如下：
1 侵入性检测方法
侵袭性方法主要指必需通过胃镜取活检标本检查的方法Hp 在胃内呈灶状分布，其密度一般在胃窦部较高，胃体、胃底较低。在质子泵抑制剂（PPI）等药物治疗后，Hp在胃内分布可发生移位，即从胃窦部移向胃体、胃底部。治疗前在胃窦多处活检进行试验可提高检测的敏感性，治疗后应在胃窦和胃体同时活检进行检测。Hp不易在肠化生上皮定植，因此重度萎缩性胃炎肠化生明显时，肠化黏膜中活检Hp阳性率低，需要多部位（包括胃窦、胃角、胃体）活检， 以提高检测准确性[1]。
1.1 细菌培养：
将胃粘膜活检标本做微需氧环境下培养，如培养出幽门螺杆菌即可诊断为幽门螺杆菌感染。因其特异性高达100%[2-4]，常被视为幽门螺杆菌感染诊断的“金标准”。可用于验证其它诊断性实验，亦可用于药敏试验、细菌分型、致病基因的研究等。但它是幽门螺杆菌诊断试验中技术要求最高的一种方法，需要经费、时间和人力均较多，因此限制了其临床使用，主要用于科学研究。还应注意，胃粘膜组织中细菌量过少，细菌繁殖能力差等因素可能会影响幽门螺杆菌的培养而导致假阴性。
1.2 快速尿素酶试验（RUT）
目前已有多种尿素酶试剂盒或试纸可供临床使用，因其操作简便、费用低、省时，成为侵入性检测方法的首选。快速尿素酶试验己有许多方法的改进，如应用化学发光pH指示剂，使结果出现更快。在内镜检查时使用幽门螺杆菌敏感化学感受检测器，需时仅1min。采用定标的快速尿素酶试验，可测定幽门螺杆菌定植密度，根据黄、绿、淡蓝反应，可对结果进行分级。细菌数量少、观察时间短、试剂质量不稳定、 胆汁反流等因素均会影响检测结果的准确性.
1.3 胃粘膜组织切片染色镜检：
将胃粘膜活检组织标本固定、脱水后常规石腊包埋、切片染色、镜下观察，根据幽门螺杆菌的形态学特征进行检测和分折，可以直接观察胃粘膜表面定植的幽门螺杆菌。其染色方法有W-S银染、改良Giemsa染色、甲苯胺蓝染色、免疫组化染色等。因染色方法的不同，各有不同的特点，其中免疫组化染色是一个高敏感和特异的染色方法，它是组织学检测的“金标准”。其中（W-S）染色效果最好，细菌清晰易辨，特异性和敏感性几乎均达100%[2，3]。但该法繁琐且需一定技术。此外HE染色法既可供组织学运用又可检查Hp。也可做为一种常规检测方法。Langdale-Brown等报道用吖啶橙荧光染色，Hp易辨认，且方法简单、快速，尤其在Hp量少时优于W-S和Giemsa染色，不易漏诊。
1.4 胃粘膜直接涂片染色镜检：
即将胃粘膜组织直接涂于玻璃片，一般用Gram染色后相差显微镜下观察幽门螺螺杆菌Pinlard用相差显微镜直接检查涂于玻璃片上的胃粘膜查Hp，敏感性达100%.
1.5 聚合酶链反应试验（PCR）检测技术
PCR 常用于临床新鲜胃活检标本的快速诊断， 其敏感性为 93%， 特异性达 100% [5] ，检出率高于细菌培养，尤其适合Hp过少以致其他方法难以检测到的标本分析或正在服用 PPI、H2RA、抗生素、铋剂的 Hp 检测[6]。PCR对HP毒力菌株的鉴定及分型、耐药基因检测及流行病学的研究具有重要的诊断价值，此外 PCR 费用及技术要求高，操作复杂，限制了其临床应用[5] 。
现在新的PCR可通过鼻胃管收集5ml胃液作PCR检测。采用胶囊包裹的尼龙线取胃液标本的方法，使这一诊断性试验的侵入性更小。胃液PCR检测幽门螺杆菌敏感性高，但存在引物特异性问题，如针对尿素酶基因的引物，可能与口腔和胃内其它尿素酶阳性菌丛起交叉反应。PCR技术具有较高的敏感性，当细菌感染数量很低时，仍能获得理想的试验结果。其次，基因检测不受临床治疗用药的干扰。再次，PCR技术也可对幽门螺旋杆菌的变异情况、致病的相关因子进行研究。此外，几乎所有的基因诊断技术同样直接用于胃液、牙斑、唾液、粪便等标本的检测，具有较高的可信度（特异性和敏感性均达 98% ）[7] 。蛋白芯片检测系统检测幽门螺旋杆菌具有操作简便快捷、灵敏度高和成本低廉的优势 ，是一种值得推广的新型检测技术。
总之Hp感染的检测应根据不同的检测目的和条件，选择不同的检测方法。细菌培养、PCR方法主要用于科研及流行病的调查。细菌培养是检测的“金标准”，但费时长；PCR检测方法在菌种鉴定、基因分型、细菌耐药等研究中起到重要作用，但由于其高度敏感性及技术要求高，在临床中的应用受到限制。RUT是侵入性检测中诊断Hp感染的首选方法，该方法简单、费用低，但灵敏度和特异性不是很高；UBT 是非侵入性 Hp 感染诊断的 “金标准”，主要用于根除 Hp 治疗后的复查评估疗效。胶体金免疫试验具有简便、快速、不需仪器设备等的优点，适合基层医院或个人自己使用。希望以后能发展出更简单更好的方法. 参考文献
[1] 乔瑞，冯义朝.幽门螺杆菌感染检测方法研究进展[R] .临床合理用药2014，17（1）：176-177
[2] 王继德， 陈烨， 徐克强， 等. 幽门螺杆菌感染几种诊断方法的准确性评价[J]. 中华消化内镜杂志， 2000， 17（4）：248 -249.
[3]李晓波， 刘文忠. 幽门螺杆菌常用诊断方法的评价[J]. 中华消化杂志， 2002， 22（11）：691 -693.
[4] Russmann H， Fbydt schmide A， Adler K， et al. Detection ofHelicobacterPylori in paraffin Embedded and in Shock Froze Gastric Biopsy Samplesby F1 uorescent In situ Hybridization[J]. J Clin Microbi， 2003， 4l（2）：813.
[5] 李晓波， 刘文忠. 幽门螺杆菌常用诊断方法的评价[J]. 中华消化杂志， 2002， 22（11）：691 -693.
[6] Datta S， Chattopadhyay S， Chowdhury A， et al. Diagnosis and genotypingof Helicobacter pylori by polymerase chain reaction of bacterial DNAfrom gastric juice[J]. JGastroenterolHepatol， 2005， 20：1253 -1259.
[7] Schabereiter-Gurtner C， Hirschl AM， Dragosics B， et al. Novel real-timePCR assay for detection of Helicobacter pylori infection and simultane-ous clarithromycin susceptibility testing of stool and biopsy specimens〔 J 〕 J Clin Microbiol， 2004， 42： 4512- 4518
【关键词】 幽门螺杆菌 检测方法
幽门螺杆菌，Helicobacter pylori，简称Hp，是一种单极、多鞭毛、末端钝圆、螺旋形弯曲的细菌。长2.5～4.0μm，宽0.5～1.0μm。在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。1994年，世界卫生组织将幽门螺杆菌列为第一类高危致恶变因子，幽门螺杆菌具有极强的传染性，人是幽门螺杆菌的唯一传染源。家庭成员中的感染者一经确诊，就必须主动接受正规的抗菌治疗，彻底清除传染源以达到防治目的，只有先查出是否感染幽门螺杆菌，再进行有效的根治，才能彻底治愈。自1983年通过胃镜取活检标本分离培养成功以来，对Hp感染的诊断已发展出了许多方法，包括有细菌学、病理学、血清学、同位素示踪、分子生物学等.由于各种方法的价格、目的、意义、要求、仪器各不相同，为了使人们能更好地选择检测方法，现综述如下：
1 侵入性检测方法
侵袭性方法主要指必需通过胃镜取活检标本检查的方法Hp 在胃内呈灶状分布，其密度一般在胃窦部较高，胃体、胃底较低。在质子泵抑制剂（PPI）等药物治疗后，Hp在胃内分布可发生移位，即从胃窦部移向胃体、胃底部。治疗前在胃窦多处活检进行试验可提高检测的敏感性，治疗后应在胃窦和胃体同时活检进行检测。Hp不易在肠化生上皮定植，因此重度萎缩性胃炎肠化生明显时，肠化黏膜中活检Hp阳性率低，需要多部位（包括胃窦、胃角、胃体）活检， 以提高检测准确性[1]。
1.1 细菌培养：
将胃粘膜活检标本做微需氧环境下培养，如培养出幽门螺杆菌即可诊断为幽门螺杆菌感染。因其特异性高达100%[2-4]，常被视为幽门螺杆菌感染诊断的“金标准”。可用于验证其它诊断性实验，亦可用于药敏试验、细菌分型、致病基因的研究等。但它是幽门螺杆菌诊断试验中技术要求最高的一种方法，需要经费、时间和人力均较多，因此限制了其临床使用，主要用于科学研究。还应注意，胃粘膜组织中细菌量过少，细菌繁殖能力差等因素可能会影响幽门螺杆菌的培养而导致假阴性。
1.2 快速尿素酶试验（RUT）
目前已有多种尿素酶试剂盒或试纸可供临床使用，因其操作简便、费用低、省时，成为侵入性检测方法的首选。快速尿素酶试验己有许多方法的改进，如应用化学发光pH指示剂，使结果出现更快。在内镜检查时使用幽门螺杆菌敏感化学感受检测器，需时仅1min。采用定标的快速尿素酶试验，可测定幽门螺杆菌定植密度，根据黄、绿、淡蓝反应，可对结果进行分级。细菌数量少、观察时间短、试剂质量不稳定、 胆汁反流等因素均会影响检测结果的准确性.
1.3 胃粘膜组织切片染色镜检：
将胃粘膜活检组织标本固定、脱水后常规石腊包埋、切片染色、镜下观察，根据幽门螺杆菌的形态学特征进行检测和分折，可以直接观察胃粘膜表面定植的幽门螺杆菌。其染色方法有W-S银染、改良Giemsa染色、甲苯胺蓝染色、免疫组化染色等。因染色方法的不同，各有不同的特点，其中免疫组化染色是一个高敏感和特异的染色方法，它是组织学检测的“金标准”。其中（W-S）染色效果最好，细菌清晰易辨，特异性和敏感性几乎均达100%[2，3]。但该法繁琐且需一定技术。此外HE染色法既可供组织学运用又可检查Hp。也可做为一种常规检测方法。Langdale-Brown等报道用吖啶橙荧光染色，Hp易辨认，且方法简单、快速，尤其在Hp量少时优于W-S和Giemsa染色，不易漏诊。
1.4 胃粘膜直接涂片染色镜检：
即将胃粘膜组织直接涂于玻璃片，一般用Gram染色后相差显微镜下观察幽门螺螺杆菌Pinlard用相差显微镜直接检查涂于玻璃片上的胃粘膜查Hp，敏感性达100%.
1.5 聚合酶链反应试验（PCR）检测技术
PCR 常用于临床新鲜胃活检标本的快速诊断， 其敏感性为 93%， 特异性达 100% [5] ，检出率高于细菌培养，尤其适合Hp过少以致其他方法难以检测到的标本分析或正在服用 PPI、H2RA、抗生素、铋剂的 Hp 检测[6]。PCR对HP毒力菌株的鉴定及分型、耐药基因检测及流行病学的研究具有重要的诊断价值，此外 PCR 费用及技术要求高，操作复杂，限制了其临床应用[5] 。
现在新的PCR可通过鼻胃管收集5ml胃液作PCR检测。采用胶囊包裹的尼龙线取胃液标本的方法，使这一诊断性试验的侵入性更小。胃液PCR检测幽门螺杆菌敏感性高，但存在引物特异性问题，如针对尿素酶基因的引物，可能与口腔和胃内其它尿素酶阳性菌丛起交叉反应。PCR技术具有较高的敏感性，当细菌感染数量很低时，仍能获得理想的试验结果。其次，基因检测不受临床治疗用药的干扰。再次，PCR技术也可对幽门螺旋杆菌的变异情况、致病的相关因子进行研究。此外，几乎所有的基因诊断技术同样直接用于胃液、牙斑、唾液、粪便等标本的检测，具有较高的可信度（特异性和敏感性均达 98% ）[7] 。蛋白芯片检测系统检测幽门螺旋杆菌具有操作简便快捷、灵敏度高和成本低廉的优势 ，是一种值得推广的新型检测技术。
总之Hp感染的检测应根据不同的检测目的和条件，选择不同的检测方法。细菌培养、PCR方法主要用于科研及流行病的调查。细菌培养是检测的“金标准”，但费时长；PCR检测方法在菌种鉴定、基因分型、细菌耐药等研究中起到重要作用，但由于其高度敏感性及技术要求高，在临床中的应用受到限制。RUT是侵入性检测中诊断Hp感染的首选方法，该方法简单、费用低，但灵敏度和特异性不是很高；UBT 是非侵入性 Hp 感染诊断的 “金标准”，主要用于根除 Hp 治疗后的复查评估疗效。胶体金免疫试验具有简便、快速、不需仪器设备等的优点，适合基层医院或个人自己使用。希望以后能发展出更简单更好的方法. 参考文献
[1] 乔瑞，冯义朝.幽门螺杆菌感染检测方法研究进展[R] .临床合理用药2014，17（1）：176-177
[2] 王继德， 陈烨， 徐克强， 等. 幽门螺杆菌感染几种诊断方法的准确性评价[J]. 中华消化内镜杂志， 2000， 17（4）：248 -249.
[3]李晓波， 刘文忠. 幽门螺杆菌常用诊断方法的评价[J]. 中华消化杂志， 2002， 22（11）：691 -693.
[4] Russmann H， Fbydt schmide A， Adler K， et al. Detection ofHelicobacterPylori in paraffin Embedded and in Shock Froze Gastric Biopsy Samplesby F1 uorescent In situ Hybridization[J]. J Clin Microbi， 2003， 4l（2）：813.
[5] 李晓波， 刘文忠. 幽门螺杆菌常用诊断方法的评价[J]. 中华消化杂志， 2002， 22（11）：691 -693.
[6] Datta S， Chattopadhyay S， Chowdhury A， et al. Diagnosis and genotypingof Helicobacter pylori by polymerase chain reaction of bacterial DNAfrom gastric juice[J]. JGastroenterolHepatol， 2005， 20：1253 -1259.
[7] Schabereiter-Gurtner C， Hirschl AM， Dragosics B， et al. Novel real-timePCR assay for detection of Helicobacter pylori infection and simultane-ous clarithromycin susceptibility testing of stool and biopsy specimens〔 J 〕 J Clin Microbiol， 2004， 42： 4512- 4518