【摘 要】
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目的 探究T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)对白细胞介素-2(IL-2)的调控作用及机制.方法 通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、流式细胞术(FACS)以及实时定量荧光聚合酶链反应(RT-PC
【机 构】
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河南大学基础医学院,河南开封 475000;军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所神经免疫与抗体工程研究室,北京 100850;河南大学基础医学院,河南开封,475000;军事科学院军事医学研
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目的 探究T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)对白细胞介素-2(IL-2)的调控作用及机制.方法 通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、流式细胞术(FACS)以及实时定量荧光聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测T细胞活化后,Jurkat高表达Tim-3(JurkatTim-3-high)与低表达Tim-3(JurkatTim-3-low)细胞系中IL-2的基因转录及蛋白表达水平;使用中和性抗人Tim-3抗体阻断Jurkat细胞系中Tim-3功能,ELISA及RT-PCR方法检测IL-2蛋白分泌及转录水平变化;通过Western蛋白免疫印迹法检测Tim-3对IL-2表达调控相关分子[包括蛋白激酶C(PKC)β1及核因子(NF)-κB亚基P65]的磷酸化的影响.结果 ELISA、FACS和RT-PCR结果均表明,Tim-3抑制IL-2的表达,使用抗人Tim-3抗体阻断后,IL-2的表达上调;Western印迹结果显示,与JurkatTim-3-low细胞相比,JurkatTim-3-high细胞中蛋白激酶PKCβ1及NF-κB亚基P65的磷酸化受到明显抑制.使用中和性抗人Tim-3抗体阻断后,PKCβ1及P65的磷酸化明显增强.结论 Tim-3对IL-2的基因转录及蛋白表达起负性调控作用,并且可能是通过抑制NF-κB(NF-κB/p65)及PKCβ1的磷酸化,从而抑制IL-2的产生.
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