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目的：探讨干扰RNA对人肝癌细胞株HepG2的CyclinD1基因的表达以及其对细胞的增殖、凋亡的影响.
方法：将由上海英潍捷基贸易服务有限公司合成的表达CyclinD1siRNA的重组质粒pU6-Cyclin D1-siRNA导人人肝癌细胞株HepG2的细胞,同时设立了阴性对照空载体转染组HepG2-neo及空白对照组HepG2.采用G418筛选稳定转染的细胞,并用倒置荧光显微镜观察细胞形态及绿色荧光蛋白的表达.采用MTT法检测细胞生长增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡情况,荧光定量PCR方法、Western blotting方法检测Cyclin D1的mRNA,蛋白表达水平的变化,证实干扰RNA对人肝癌细胞株HepG2的Cyclin D1基因的沉默效果.
结果：经G418筛选得到稳定表达的细胞株,与阴性对照组及空白对照组相比,细胞生长速度明显减慢,转染组的CyclinD1的mRNA,蛋白表达水平与阴性对照空载体转染组HepG2-neo及空白对照组HepG2比较均明显下降;CyclinD1的干扰RNA可导致人肝癌细胞株HepG2细胞凋亡.
结论：RNA干扰技术可有效抑制细胞的增殖,导致细胞的凋亡,CyclinD1的干扰RNA可使CyclinDl mRNA及蛋白的表达水平均明显下降,表明CyclinD1与肿瘤细胞的增殖密切相关.CyelinD1的siRNA为治疗肝癌开辟新途径.