研究低浓度过氧化氢(H2O2)处理对人黑素细胞黏附功能及自噬水平的影响,并筛选自噬相关lncRNA。
方法从健康男性包皮环切术后获得的皮肤组织中分离、培养黑素细胞。对数生长期黑素细胞分为对照组(无H2O2处理)、H2O2组(400 μmol/L H2O2处理)和H2O2 + NAC组(4 mmol/L NAC预处理细胞2 h,然后加入400 μmol/L H2O2)。处理5 d后,用免疫荧光检测上述各组黑素细胞E-钙黏素、微管相关蛋白1轻链3(LC3)及p62表达,透射电镜观察细胞结构及自噬体,Western印迹法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,运用基因芯片技术筛选自噬相关lncRNA。采用Graphpad Prism 6软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,并用Tukey检验进行两两间的多重比较。
结果共聚焦显微镜下,与对照组和H2O2 + NAC组相比,H2O2组黑素细胞E-钙黏素及LC3荧光强度均明显下降,而p62荧光强度增高,且电镜下H2O2组黑素细胞内自噬体数量减少。Western印迹结果显示,H2O2处理组黑素细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值(0.604 ± 0.012)显著低于对照组(1.200 ± 0.081,q=7.718,P < 0.01)及H2O2 + NAC组(1.017 ± 0.062,q = 5.076,P < 0.05),同时其p62/β肌动蛋白值(0.881 ± 0.079)显著高于对照组(0.456 ± 0.121,q=4.847,P < 0.05)及H2O2 + NAC组(0.492 ± 0.049,q=4.439,P < 0.05)。H2O2 + NAC组与对照组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ值及p62/β肌动蛋白值差异均无统计学意义(P > 0.05)。基因芯片结果显示,与对照组相比,H2O2组中有18个自噬相关lncRNA与黑素细胞提前衰老有关,从中筛选出了明显上调的自噬相关lncRNA NONHSAT190308.1(差异> 10倍)。
结论低浓度H2O2可使黑素细胞E-钙黏素表达下降,降低黑素细胞自噬水平,上调自噬相关lncRNA NONHSAT190308.1表达水平。