探讨同源盒基因(Hox)/骨形态发生蛋白-4(BMP-4)信号在小儿先天性肛门直肠畸形中的表达。
方法实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测音猬因子(Shh)、BMP-4和Hox在小儿先天性直肠肛门畸形中的表达水平。用乙烯硫脲诱导孕鼠胎仔产生先天性肛门畸形鼠胚。免疫组织化学和RT-qPCR检测受孕后第12、13、14、15、16天胎仔直肠末端Shh、BMP-4和Hox的表达。Western blot检测受孕第16天胎仔直肠末端Shh、BMP-4和Hox水平。
结果对照组中Shh、BMP-4和Hox水平约为小儿先天性肛门直肠高位畸形组织中2倍;低位畸形组织中Shh、BMP-4和Hox水平与对照组比较没有明显变化。免疫组织化学结果发现,对照组和乙烯硫脲组中Shh、BMP-4和Hox在13 d平均吸光度值达到高峰,在14、15、16 d出现明显下降;对照组和乙烯硫脲组Shh 13 d时平均吸光度值依次为:0.405±0.014、0.284±0.024,BMP-4 13 d时平均吸光度值依次为:0.287±0.023、0.214±0.012 ,Hox 13 d时平均吸光度值依次为:0.395±0.029、0.199±0.015,Shh、BMP-4和Hox水平均低于对照组。对照组和乙烯硫脲组中BMP-4 mRNA水平在13 d有所增高,从14 d开始出现明显下降。对照组和乙烯硫脲组中Shh、Hox mRNA水平在12、13、14 d表达较高,而15 d表达水平明显下降,16 d有微弱回升。乙烯硫脲组中Shh、BMP-4和Hox蛋白表达水平均明显低于对照组,Shh从1.314±0.024下降至1.035±0.018,BMP-4从1.412±0.034下降至0.854±0.028,Hox从1.052±0.014下降至0.632±0.041。
结论Hox/BMP-4信号在小儿先天性肛门直肠高位畸形中低表达,乙烯硫脲可以干扰胚胎发育过程中Hox/BMP-4信号表达。