【摘 要】
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本文旨在探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor.HGF)对神经元氧糖剥夺/再灌注损伤的影响.取原代培养12 d的Sprague-Dawley大鼠大脑皮层神经元,无糖、无氧(95%N2+5%CO
【基金项目】
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the Key Project of Science and Technology Program of Ministry of Education of China;
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本文旨在探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor.HGF)对神经元氧糖剥夺/再灌注损伤的影响.取原代培养12 d的Sprague-Dawley大鼠大脑皮层神经元,无糖、无氧(95%N2+5%CO2)孵育2 h后,换含25 mmol/L葡萄糖的培养液、常氧培养0～24 h,以MTT比色法检测细胞活力、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出率作为细胞损伤指标,建立体外氧糖剥夺/再灌注损伤细胞模型;用流式细胞仪和Hoechst 33258染色分析细胞凋亡率;用RT-PCR和Western blot分别检测大鼠脑皮层神经元HGF受体c-Met mRNA和蛋白的表达.于氧糖剥夺2 h/再灌注24 h处理前2 h,加入不同终浓度(5～120 ng/mL)的HGF,观察HGF对皮层神经元的影响.结果显示,c-Met表达于皮层神经元,氧糖剥夺2 h/再灌注24 h后,c-Met mRNA和蛋白表达均显著上调,神经元细胞活力明显降低,LDH漏出率和细胞凋亡率显著增高.HGF预处理明显促进氧糖剥夺/再灌注损伤神经元的存活,降低LDH漏出率,最大效应剂量为80 ng/mE.流式细胞术和Hoechst33258染色结果均显示,HGF(80 ng/mL)显著降低氧糖剥夺/再灌注神经元的细胞凋亡率.此外,c-Met抑制剂SU11274(5 μmol/L)完全阻断HGF的神经保护作用.结果表明,HGF对皮层神经元氧糖剥夺/再灌注损伤具有直接的保护作用,呈一定的剂量依赖关系,并能有效对抗神经元凋亡.
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