【摘 要】
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本文比较了前人提取致癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）Ti质粒的方法,改变了溶菌的条件和蛋白质除去的程序,找到一种简易、快速、重复性高的提取Ti质粒的方法。本文的方法是将一份致癌农杆菌细胞同四份碱性SDS溶菌液（pH12.6）混合,这样溶菌液的pH为10.5,然后将此碱性溶菌液（pH10.5）置37℃保温30分钟。为了有效地提取Ti质粒又改变了去除蛋白质的程序,溶菌液首
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本文比较了前人提取致癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）Ti质粒的方法,改变了溶菌的条件和蛋白质除去的程序,找到一种简易、快速、重复性高的提取Ti质粒的方法。本文的方法是将一份致癌农杆菌细胞同四份碱性SDS溶菌液（pH12.6）混合,这样溶菌液的pH为10.5,然后将此碱性溶菌液（pH10.5）置37℃保温30分钟。为了有效地提取Ti质粒又改变了去除蛋白质的程序,溶菌液首先用苯酚—氯仿抽提,随之加5M NaCl于溶菌液中,使NaCl最终浓度达0.6M,溶菌液于冰水中盐析2小时,悬浮的溶菌液经高速高心,大部分蛋白质和变性DNA被除去,DNA提取液由混浊变清。这种方法也可以用于提取其它菌株中的小分子质粒。
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